第三節(jié)　生殖器寄生蟲檢驗(yàn)技術(shù)

一、牛胎毛滴蟲檢查法

（一）病料采集

牛胎毛滴蟲存在于病母牛的陰道與子宮的分泌物、流產(chǎn)胎兒的羊水、羊膜或其第四胃內(nèi)容物中，也存在于公牛的包皮鞘內(nèi)，檢查時(shí)應(yīng)采取以上各處的病料尋找蟲體。

檢查以能見到運(yùn)動(dòng)活潑的蟲體為準(zhǔn)，故在采集病料時(shí)必須盡可能地避免污染，以免其他鞭毛蟲混入病料造成誤診。采集用的器皿和沖洗液等應(yīng)加熱使接近體溫，否則蟲體驟然遇冷會(huì)失去活動(dòng)力或死亡。沖洗液應(yīng)采用以玻璃裝置制備的蒸餾水配制的生理鹽水，以保證沖洗液中不含金屬離子，減少金屬離子對(duì)蟲體的影響，病料采集后應(yīng)盡快地進(jìn)行檢查。

由母畜采集病料，是直接取陰道分泌的透明黏液。建議用一根長(zhǎng)45cm，直徑1.0cm的玻璃管，在距一端的12cm處，彎成150℃角，消毒后備用。使用時(shí)將管的“短臂”插入受檢畜的陰道，另一端接一橡皮管并抽吸，少量陰道黏液即可吸入管內(nèi)。取出玻管，兩端塞以棉球，帶回實(shí)驗(yàn)室檢查。

收集公牛包皮沖洗液時(shí)，應(yīng)先準(zhǔn)備100～150ml加溫到30℃～35℃的生理鹽水，用針筒將生理鹽水注入包皮腔。用手指將包皮口捏緊，用另一只手按摸包皮后部，而后放松手指，將液體收集于廣口瓶中待查。

流產(chǎn)胎兒，可取其第四胃內(nèi)容物、胸水或腹水檢查。

（二）檢查方法

1.壓片檢查法　將收集到的病料，立即放于載玻片上，并防止材料干燥。對(duì)濃稠的陰道黏液，檢查前最好以生理鹽水稀釋2～3倍，羊水或包皮洗滌物最好先以2000r／min離心5min，而后以沉淀物制片檢查。未染色的標(biāo)本主要檢查活動(dòng)的蟲體，在顯微鏡下可見其長(zhǎng)度略大于一般的白細(xì)胞，能清楚地見到波動(dòng)膜，有時(shí)尚可見到鞭毛，在蟲體內(nèi)部可見含有一個(gè)圓形或橢圓形的有強(qiáng)折光性的核。波動(dòng)膜的發(fā)現(xiàn)，常作為本蟲與其他一些非致病性鞭毛蟲和纖毛蟲在形態(tài)上相區(qū)別的依據(jù)。

2.涂片染色檢查法　以上收集到的標(biāo)本，也可以固定、染色制成永久性標(biāo)本，制片辦法很多，常用的檢查方法有兩種。

（1）蘇木素染色法

①固定液和染色液

邵氏固定液（Schaudinn’s fixative）：

氯化高汞（Mercuric Chloride）飽和水溶液　 2份

95%酒精　　　　　　　　　　　　　　　　　1份

使用前在每100ml氯化高汞—酒精混合液中加冰醋酸5～10ml。

蘇木素染液：將蘇木素1.0g溶于10ml純酒精內(nèi)，再加蒸餾水200ml，放置21～28d。

碘酒：加碘到70%酒精中使呈深琥珀色。

②染色法：將涂片浸入40℃的邵氏固定液中3min，再將涂片移入70%酒精中浸泡2min；再移入碘酒精中浸泡10min；移入70%酒精中浸泡1～2h；移入50%酒精中浸泡5min；流水中洗10min；在40℃的20%硫酸銨鐵水溶液中浸2min；流水中洗3min。，40℃的蘇木素染液中染1min；流水中洗2min；冷的2%硫酸銨鐵水溶液中脫色5～10min；流水中洗10～30min；逐級(jí)通過50%、70%、80%、90%、100%的酒精，純酒精與二甲苯的等量混合液和二甲苯的等量混合液和二甲苯，每種液體中各2min；最后滴加一滴加拿大膠，蓋上蓋玻片封固即成。

（2）姬氏染色法：此法簡(jiǎn)便，步驟如下：取含蟲的陰道分泌物制成抹片；不待干，立即用20%福爾馬林蒸氣固定，約需1h（即用培養(yǎng)皿，皿內(nèi)放些加有20%福爾馬林的棉花，用兩根玻棒架于棉花上，將涂片抹面向下，置玻棒上）；取下玻片，待干后，甲醇固定2min；用姬氏染色法染色；水洗、晾干、檢查。

二、馬媾疫錐蟲檢查法

馬媾疫錐蟲在末梢血液中很少出現(xiàn)，而且數(shù)量也很少，因此血液學(xué)檢查在馬媾疫診斷上的用處不大。檢查材料主要應(yīng)采取浮腫部皮膚或丘疹的抽出液，尿道及陰道的黏膜刮取物，特別在黏膜刮取物中最易發(fā)現(xiàn)蟲體。

1.病料采集　采取病料時(shí)，浮腫液和皮膚丘疹液用消毒的注射器抽取，為了防止吸入血液發(fā)生凝固，于注射器內(nèi)先吸入適量的2%檸檬酸鈉生理鹽水。馬陰道黏膜刮取物的采取，先用陰道擴(kuò)張器擴(kuò)張陰道，再用長(zhǎng)柄銳匙在其黏膜有炎癥的部位刮取，刮時(shí)應(yīng)稍用力，使刮取物微帶血液，則其中容易檢到錐蟲。采取公馬尿道刮取物時(shí)，應(yīng)先將馬保定，左手伸入包皮內(nèi)以食指插入龜頭窩中，徐徐用力以牽出陰莖。此時(shí)可用消毒的長(zhǎng)柄銳匙插入尿道內(nèi)，刮取病料。也可用滅菌紗布，以生理鹽水浸濕，用敷料鉗夾持，插入公馬尿道或母馬陰道，擦洗后，取出紗布，洗入無(wú)菌生理鹽水中，將鹽水離心沉淀，取沉淀物檢查。

2.檢查方法　將采集的病料，加適量的生理鹽水，置載玻片上，覆以蓋玻片，制成壓滴標(biāo)本檢查；也可以制成抹片，用姬氏液染色后檢查。