第二節(jié)　家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

（1）學(xué)習(xí)掌握家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱模型的復(fù)制方法。

（2）觀察腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）致家兔發(fā)熱時(shí)的癥狀，了解家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱時(shí)的體溫變化規(guī)律以及機(jī)體的功能與代謝變化特點(diǎn)。

（3）加深對(duì)內(nèi)生致熱原致家兔發(fā)熱機(jī)制的理解。

實(shí)驗(yàn)原理

TNF-α主要由脂多糖等激活的單核-巨噬細(xì)胞分泌的一種小分子蛋白質(zhì)。小劑量的TNF-α直接作用于體溫調(diào)節(jié)中樞，上調(diào)體溫調(diào)定點(diǎn)，使機(jī)體產(chǎn)熱增加，散熱減少，體溫升高，出現(xiàn)單相熱。大劑量的TNF-α可出現(xiàn)雙相熱，第一熱相是TNF-α直接作用于體溫調(diào)節(jié)中樞所致，第二熱相則是TNF-α通過(guò)作用于單核-巨噬細(xì)胞，促使其分泌白細(xì)胞致熱原即白介素-1而引起的。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)耳緣靜脈注射小劑量的重組TNF-α（recombinant TNF-α，rTNF-α）復(fù)制家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱模型，了解rTNF-α引起的單相熱的特點(diǎn)，理解rTNF-α在發(fā)熱發(fā)生機(jī)制中的作用。

實(shí)驗(yàn)對(duì)象及相關(guān)用品

1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象

健康家兔（雌雄均可，體重2.0～3.0kg）。

2.實(shí)驗(yàn)相關(guān)用品

臺(tái)秤，兔臺(tái)，5mL注射器，醫(yī)用人體肛溫表，液體石蠟，無(wú)熱源生理鹽水，rTNF-α（用無(wú)熱源生理鹽水稀釋成0.5μg/mL），BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，張力傳感器，蛙心夾。

實(shí)驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組和內(nèi)生致熱原性發(fā)熱模型組。

觀測(cè)指標(biāo)

（1）體溫：通過(guò)觀察靜脈注射rTNF-α引起家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱時(shí)的體溫變化趨勢(shì)，了解小劑量rTNF-α所引起的單相熱的特點(diǎn)。

（2）心率：了解rTNF-α引起家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱時(shí)循環(huán)系統(tǒng)的功能變化。

（3）呼吸頻率和呼吸幅度：了解內(nèi)生致熱原性發(fā)熱時(shí)呼吸系統(tǒng)的功能變化。

（4）惡寒、耳廓充血和球結(jié)膜充血：了解rTNF-α導(dǎo)致家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱時(shí)的皮膚產(chǎn)熱和散熱變化特點(diǎn)。

（5）排尿：理解內(nèi)生致熱原性發(fā)熱時(shí)水和電解質(zhì)代謝的變化特點(diǎn)。

（6）排便：了解內(nèi)生致熱原性發(fā)熱時(shí)消化系統(tǒng)功能的改變。

實(shí)驗(yàn)步驟

（1）取健康家兔4只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組和內(nèi)生致熱原性發(fā)熱模型組。

（2）家兔稱重后仰臥位固定于兔臺(tái)上。

（3）連接傳感器，描記呼吸。

①將蛙心夾夾在胸廓活動(dòng)最明顯處的胸壁上，另一端用絲線系于張力傳感器感應(yīng)片的小孔上。張力傳感器與BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的1通道連接。

②打開電腦，運(yùn)行BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，進(jìn)入系統(tǒng)主界面，在輸入信號(hào)下拉菜單的1通道中，選擇張力，開始記錄正常家兔呼吸頻率和幅度。

（4）觀察并記錄各組家兔的一般情況：基礎(chǔ)體溫（肛溫），惡寒（豎毛），耳廓（耳根溫度、靜脈的顏色和充盈度），球結(jié)膜（充血程度），呼吸（頻率和幅度），心率，排尿，排便等。

（5）內(nèi)生致熱原性發(fā)熱模型組經(jīng)耳緣靜脈注射無(wú)熱源生理鹽水稀釋的rTNF-α（0.5μg/mL），劑量為2mL/kg；正常對(duì)照組由耳緣靜脈注入無(wú)熱源生理鹽水（2mL/kg）。

（6）注射完畢后密切觀察上述指標(biāo)的變化并記錄，其中肛溫在注射rTNF-α后，每10min測(cè)1次，共100min。

注意事項(xiàng)

（1）家兔應(yīng)健康，雌雄均可，雌性無(wú)孕，體溫正常（38.5～39.5℃）。

（2）rTNF-α無(wú)熱源生理鹽水稀釋液從4℃冰箱取出后，應(yīng)先在37℃的水中溫浴20min，然后再使用。

（3）每次測(cè)量家兔肛溫時(shí)，需將醫(yī)用人體肛溫表甩到35℃以下，末端涂少許液體石蠟，輕輕試探著插入肛門內(nèi)3.5～4cm，插入時(shí)不得用力太猛或旋轉(zhuǎn)體溫計(jì)，置肛門內(nèi)3min后取出，查看體溫計(jì)讀數(shù)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告要點(diǎn)

（1）實(shí)驗(yàn)題目：家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱。

（2）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫Z(yǔ)言簡(jiǎn)練、目的明確。

（3）實(shí)驗(yàn)原理：闡述通過(guò)耳緣靜脈注射rTNF-α來(lái)復(fù)制家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱模型的實(shí)驗(yàn)原理。

（4）實(shí)驗(yàn)對(duì)象：家兔。

（5）實(shí)驗(yàn)材料。

（6）觀測(cè)指標(biāo)。

（7）實(shí)驗(yàn)步驟：簡(jiǎn)要書寫主要操作步驟，不要照抄實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，要簡(jiǎn)明扼要。

（8）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄見表8-2。要及時(shí)、詳細(xì)、準(zhǔn)確記錄家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱時(shí)的體溫、心率、呼吸頻率、呼吸幅度的變化特點(diǎn)和家兔發(fā)熱時(shí)的惡寒、耳廓充血、球結(jié)膜充血、排尿排便等表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄要實(shí)事求是，切忌編造數(shù)據(jù)。

表8-2　家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄

（9）分析討論：應(yīng)緊扣實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以家兔發(fā)熱時(shí)的體溫、心率、呼吸頻率、呼吸幅度的變化特點(diǎn)和家兔發(fā)熱時(shí)的惡寒、耳廓充血、球結(jié)膜充血、排尿排便等表現(xiàn)為切入點(diǎn)，用所學(xué)的理論知識(shí)解釋rTNF-α導(dǎo)致家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱時(shí)家兔出現(xiàn)這些變化的機(jī)制，闡明其代償意義，進(jìn)而理解發(fā)熱時(shí)機(jī)體功能代謝變化的機(jī)制及代償意義。

（10）實(shí)驗(yàn)結(jié)論：根據(jù)內(nèi)生致熱原性發(fā)熱時(shí)家兔出現(xiàn)的功能代謝變化歸納出的一般的概括性判斷，對(duì)本實(shí)驗(yàn)所能驗(yàn)證的概念、原則或理論的進(jìn)行簡(jiǎn)明總結(jié)。

（11）實(shí)驗(yàn)分工：寫出在家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱實(shí)驗(yàn)中本組成員所負(fù)責(zé)的具體工作。

思考題

1.分別給家兔注射小劑量和大劑量的rTNF-α引起家兔發(fā)熱的特點(diǎn)有什么不同？其機(jī)制如何？

2.如果通過(guò)耳緣靜脈注射大劑量的rTNF-α來(lái)復(fù)制家兔內(nèi)生致熱原性發(fā)熱模型，你認(rèn)為應(yīng)該怎樣修改實(shí)驗(yàn)方案？

（天津醫(yī)科大學(xué)　張利軍）