酸性磷酸酶染色(
酸性磷酸酶是一組能在酸性pH條件下水解磷酸酯的酶,它定位于溶酶體中,并被認(rèn)為是這些細(xì)胞器的標(biāo)志酶。
1.固紫醬GBC(Fast garnet,GBC)染色法(ICSH推薦方法)
(1)原理:在酸性條件下血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶能水解萘酚AS-BI磷酸,釋放出萘酚AS-BI,再與重氮鹽偶聯(lián),形成不溶性有色沉淀,定位于胞質(zhì)內(nèi)。
(2)操作步驟:新鮮干燥涂片冷固定30s,水洗5min,晾干。浸入基質(zhì)液中,置于37℃溫箱45min,水洗,晾干。蘇木精溶液復(fù)染20min后水洗,0.5%氨水返藍(lán),水沖,晾干。鏡檢。
(3)抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)。
基質(zhì)液配制:按AcP同樣方法配制基質(zhì)液10ml,加75mg酒石酸,用NaOH調(diào)至pH5.0,過濾。立即使用。
(4)陽性結(jié)果:酶活性部位為紫紅色。
2.副品紅染色法(ICSH推薦方法)
(1)操作步驟:兩張新鮮干燥涂片冷固定30s,水洗5min,晾干。分別浸入兩缸(其中一缸加酒石酸)基質(zhì)液中,置于37℃溫箱90min,水洗5分鐘,晾干。蘇木精溶液復(fù)染20min,水洗,0.5%氨水返藍(lán),水沖,晾干。鏡檢。
(2)結(jié)果判斷:陽性結(jié)果為胞質(zhì)中出現(xiàn)鮮紅色顆粒。
(3)臨床意義:毛細(xì)胞白血?。℉CL)的多毛細(xì)胞呈陽性反應(yīng),個(gè)別病例可見陰性,陽性為中等強(qiáng)度或強(qiáng)陽性。并抗L(+)-酒石酸。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道和筆者觀察40%淋巴瘤具有抗酒石酸功能,特別是脾淋巴瘤、伴毛細(xì)胞的脾淋巴瘤具有較強(qiáng)耐酒石酸功能,較難于HCL相鑒別。少部分B-慢淋、慢粒急淋變和T-急淋等淋巴系統(tǒng)白血病也具有耐酒石酸功能。原始單核和幼稚單核細(xì)胞AcP為強(qiáng)陽性反應(yīng),個(gè)別病例可抗酒石酸;原粒細(xì)胞對(duì)AcP反應(yīng)不一,部分原始及早幼粒細(xì)胞可見中等強(qiáng)度陽性,中幼粒細(xì)胞AcP較弱,異常早幼粒細(xì)胞較強(qiáng)。T-ALL AcP陽性率較高,顆粒粗大;B-ALL AcP呈陰性或弱陽性反應(yīng)。漿細(xì)胞AcP呈較強(qiáng)的陽性反應(yīng),陽性物為大粗顆粒和珠狀散在分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。巨核細(xì)胞呈較強(qiáng)的陽性反應(yīng)。戈謝細(xì)胞AcP呈強(qiáng)陽性反應(yīng);尼曼-匹克細(xì)胞呈陰性或弱陽性反應(yīng)。網(wǎng)狀細(xì)胞AcP呈強(qiáng)陽性反應(yīng),并具有抗酒石酸功能。
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