5．怎樣配制母種培養(yǎng)基？

（1）常用母種培養(yǎng)基：

配方一：馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基。馬鈴薯200克、葡萄糖20克、瓊脂20克、水1　000毫升。

配方二：馬鈴薯、蔗糖培養(yǎng)基。馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂20克、水1　000毫升。

配方三：馬鈴薯綜合培養(yǎng)基。馬鈴薯200克、葡萄糖20克、瓊脂20克、磷酸二氫鉀3克、硫酸鎂1．5克、維生素B　110毫克、水1　000毫升。

（2）培養(yǎng)基的制作方法：先將馬鈴薯洗凈去皮，稱取200克，切成薄片，加水1　100～1　200毫升，煮沸15分鐘左右。當(dāng)煮至馬鈴薯酥而不爛時(shí)，用4層紗布過濾，加入事先用水泡軟的瓊脂，繼續(xù)加熱煮沸，直到瓊脂完全溶化。然后再倒入1　000毫升的燒杯中，再根據(jù)配方分別加入其他材料，加熱攪拌，使之完全溶化。濾液不足1　000毫升時(shí)，用開水補(bǔ)足，趁熱用漏斗分裝于試管中，每支試管的裝量為試管高度的1／5，切勿使培養(yǎng)基沾到試管上部的內(nèi)壁。待培養(yǎng)基冷卻凝固后，塞上棉塞，每7支試管扎成一捆，上部棉塞部分，用聚丙烯塑料膜包起，外面再罩一層牛皮紙包扎好，以免滅菌時(shí)水蒸汽浸濕棉塞。

（3）滅菌：對(duì)于裝在試管中的體積較小，一般用手提式高壓鍋滅菌即可，也可用家庭用壓力鍋滅菌。滅菌壓力為每平方厘米1～1．4千克（家用壓力鍋?zhàn)⒁饪凑f明書上的壓力），滅菌30分鐘（注意開鍋后，排盡冷氣再加壓，壓力達(dá)到要求后開始計(jì)時(shí)）。然后?；?，自然降壓至零，再放氣、開蓋，趁熱取出試管束，放在桌面上擺成斜面，斜面長度應(yīng)占試管長度的3／5為好。待冷卻凝固后，即可接種。

（3）接種：接種多在接種箱中進(jìn)行，接種前先對(duì)接種箱進(jìn)行消毒。將斜面試管、接種工具、酒精燈、酒精瓶、酒精棉球等用品放入接種箱內(nèi)，按每立方米空間甲醛10毫升、高錳酸鉀5克的用量，先將高錳酸鉀放入瓷碗中，放進(jìn)接種箱內(nèi)。瓷碗中再倒入甲醛液，迅速封閉接種箱，進(jìn)行熏蒸消毒，半小時(shí)后再接種。接種時(shí)，將雙手伸入接種箱，并帶進(jìn)購買來的母種。再用酒精棉球擦拭雙手和母種試管外壁，點(diǎn)燃酒精燈，灼燒接種鉤，然后放入酒精瓶中備用。用左手拿斜面試管和母種試管，并用右手小拇指和無名指分別夾住兩試管的棉塞拔出。再從酒精瓶中取出接種鉤，烘干，伸入母種試管內(nèi)，從中鉤出一小塊帶菌絲的培養(yǎng)基，放入另一支試管的斜面中央，再塞好棉塞，即完成一支試管的接種。將試管放在右側(cè)，以后再取一支斜面試管，繼續(xù)上述操作，直到將全部試管接種完。接種完的試管仍按原來的樣子包扎好。