實(shí)驗(yàn)三　實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和人體表面微生物的檢查

一、目的要求

1.證明實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與體表存在著微生物。

2.比較來自不同場(chǎng)所與不同條件下的細(xì)菌數(shù)量和類型。

3.觀察不同類群微生物的菌落形態(tài)特征。

4.體會(huì)無菌操作的重要性。

二、基本原理

平板培養(yǎng)基含有細(xì)菌生長所需要的營養(yǎng)成分，當(dāng)取自不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在適宜溫度下培養(yǎng)1～2天，每一種菌體即能通過很多次細(xì)胞分裂而進(jìn)行繁殖，形成一個(gè)可見的細(xì)胞群體的集落，稱為菌落。每一種細(xì)菌所形成的菌落都有它自己的特點(diǎn)，例如菌落的大小，表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或不透明或半透明，顏色的不同以及質(zhì)地疏松或緊密等。因此，可通過平板培養(yǎng)來檢查環(huán)境中細(xì)菌的數(shù)量和類型。

三、器材

1.培養(yǎng)基:牛肉膏蛋白胨瓊脂平板。

2.儀器及其他用具:無菌水，滅菌棉簽（裝在試管內(nèi)），接種環(huán)，試管架，酒精燈，記號(hào)筆，廢液缸。

四、操作步驟

1.寫標(biāo)簽

在培養(yǎng)皿的底部寫上班級(jí)、姓名、日期、樣品來源。

2.實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌檢查

（1）空氣

將一個(gè)平板放在當(dāng)時(shí)做實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室，打開皿蓋，使瓊脂表面暴露在空氣中；將另一個(gè)平板放在無人走動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室，打開皿蓋，放置1h后蓋上皿蓋。

（2）實(shí)驗(yàn)臺(tái)和門的旋鈕

取無菌棉簽并用無菌水沾濕，在實(shí)驗(yàn)臺(tái)或門旋鈕上擦拭約2cm²的范圍，將棉簽在無菌操作的條件下，在平板上滾動(dòng)接種。

3.人體細(xì)菌的檢查

（1）手指（洗手前后）

首先，用未洗的手在瓊脂表面來回劃線，蓋上皿蓋，然后用肥皂洗手后，在另一個(gè)平板上來回劃線，蓋上皿蓋。

（2）頭發(fā)

揭開皿蓋，用手將頭發(fā)在平板上方用力搖動(dòng)數(shù)次，使細(xì)菌降落到平板的表面，蓋上皿蓋。

（3）咳嗽

將去蓋的平板放在離口6～8cm處，對(duì)著瓊脂表面用力咳嗽，蓋上皿蓋。

（4）鼻腔

取無菌棉簽，在鼻腔內(nèi)滾動(dòng)數(shù)次，接種于平板上。

4.將所有平板反轉(zhuǎn)，30℃培養(yǎng)1～2天

5.結(jié)果記錄

（1）菌落計(jì)數(shù)。

（2）觀察菌落特征。

五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1.結(jié)果

2.思考題

通過本實(shí)驗(yàn)，在防止培養(yǎng)物的污染和細(xì)菌的擴(kuò)散方面，你學(xué)到些什么？有什么體會(huì)？