帶有小粒的懸浮液和膠體類物質具有向四面八方散射入射光的性質。測定光線通過溶液混懸液顆粒后的光吸收或光散射強度以測定物質組分含量的一種分析方法,稱為散射光譜分析法。常用的方法為比濁法。

比濁法的原理:利用光線通過混懸液時,液體中的顆粒若小于入射光波長的1/2,則部分入射光被散射,使透射光相應減弱。在一定條件下散射光的強度(或透射光減弱的程度)和混懸液中的顆粒數(shù)量成正比,根據(jù)光線減弱的程度測定混懸液中顆粒的濃度。比濁法的測定原理、方法、計算等諸多方面與比色法相似,但本質不同?；鞈乙簾o特異吸收光譜,只是混懸液顆粒將入射光散射(遮擋),使透光度減弱。比濁法測定需用特殊的比濁計,如激光比濁儀。

比濁法方法簡便,易于掌握,但精確性和特異性較差,易受外界諸多因素的影響,其中突出的問題是顆粒大小和濁度曲線的影響。因此,從制備混懸液至測定時應力求做到以下幾點:①混懸顆粒大小應盡可能一致,使重復性好。②混懸顆粒在一定時間內(nèi),至少10min內(nèi)應維持穩(wěn)定,使顆粒不易相互聚集變粗、變大。③大多數(shù)混懸液隨放置時間的延長,顆粒易變粗、變大從而加快沉淀,因此應及時比濁。如出現(xiàn)沉淀太快,可加入保護性膠體,如聚乙烯吡咯烷酮、表面活性劑等。④溫度升高能加快分子間的碰撞,易使某些在室溫下細小均勻的顆粒變?yōu)榇执蟮男鯛畛恋?。⑤溶液的p H影響沉淀的形成和沉淀顆粒的大小,如蛋白質、酶類在其等電點時最易形成顆粒并沉淀。⑥避免其他電解質和非電解質對沉淀反應速率與穩(wěn)定性的影響。⑦在一定條件下,波長越短,散射光越強。所以,散射光的出現(xiàn)在紫外光區(qū)比可見光區(qū)靈敏得多。

目前臨床生物化學檢驗中應用最多的比濁法是免疫比濁法,如載脂蛋白、免疫球蛋白、補體類,以及一些微量的特殊蛋白質,如C反應蛋白、前清蛋白、β2-微球蛋白等均用免疫比濁法快速定量。