常用電泳分析技術(shù)
(一)醋酸纖維素薄膜電泳
醋酸纖維素薄膜電泳(CAE)是以醋酸纖維素薄膜作為支持物的一項(xiàng)電泳技術(shù)。醋酸纖維素是將纖維素的羥基乙?;纬傻睦w維素醋酸酯,將其制成的薄膜,稱為醋酸纖維素薄膜,簡(jiǎn)稱醋纖膜。醋酸纖維素幾乎不帶電荷,吸附作用和電滲作用都很微弱。醋纖膜微孔細(xì)小,質(zhì)地致密,標(biāo)本電泳速度快,區(qū)帶整齊,分辨率高,幾乎無(wú)拖尾現(xiàn)象。它不與染料著色,漂洗時(shí)染料易脫去,背景白凈,區(qū)帶易于觀察。經(jīng)冰醋酸-乙醇溶液透明可進(jìn)行掃描分析,電泳區(qū)帶可長(zhǎng)期保存。
CAE適用于血清蛋白、血漿脂蛋白、甲胎蛋白、同工酶和核酸等分離分析。
(二)瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳(AGE)是以瓊脂糖凝膠作為支持物的一種電泳技術(shù)。瓊脂糖是由瓊脂分離純化而得,其化學(xué)組成為D-半乳糖和3,6-脫水L-半乳糖。由于去除了硫酸根和羥基基團(tuán)的瓊脂膠,因此吸附作用和電滲作用大為降低;又因含水量大,近似自由電泳,故電泳速度快,區(qū)帶分離清晰、整齊,是一種較好的電泳支持介質(zhì)。瓊脂糖透明無(wú)紫外吸收,電泳過(guò)程和結(jié)果可直接用紫外燈檢測(cè)及定量測(cè)定;瓊脂糖不與染料結(jié)合,染色后背景染料容易洗脫;凝膠可干燥制成薄膜,結(jié)果可長(zhǎng)期保存。
AGE適用于血漿脂蛋白、免疫球蛋白、同工酶和核酸等分離。
(三)聚丙烯酰胺凝膠電泳
聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的一種電泳技術(shù)。聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(Acr)單體和甲叉雙丙烯酰胺(Bis)雙體在催化劑(過(guò)硫酸銨)和加速劑(四甲基乙二胺,TEMED)作用下聚合交聯(lián)而成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)凝膠。由于聚丙烯酰胺凝膠是一種人工合成的物質(zhì),可根據(jù)待分離物質(zhì)的分子大小,在聚合前調(diào)整各單體的濃度比,選擇最合適的凝膠成分,使之有適宜的孔徑和較好的機(jī)械性能。凝膠中富含酰胺鍵,親水性強(qiáng);在溶液中不電離、不帶電荷,吸附作用和電滲作用很小;而且對(duì)熱的穩(wěn)定性很好,受p H的影響較小;可以通過(guò)改變交聯(lián)度調(diào)節(jié)孔徑大小范圍,凝膠無(wú)色透明,易于觀察,能準(zhǔn)確分離各蛋白質(zhì)的組分,是一種理想的電泳支持物。
PAGE適用于蛋白質(zhì)、酶、核酸等生物分子的分離、鑒定和定量,也可用于分子量和等電點(diǎn)的測(cè)定。
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