實(shí)訓(xùn)20　鮮牛奶的消毒實(shí)驗(yàn)

一、實(shí)訓(xùn)目的

（1）了解鮮牛奶中微生物的生長(zhǎng)情況。

（2）學(xué)習(xí)并掌握巴氏消毒法。

（3）了解細(xì)菌的分離和活菌計(jì)數(shù)方法。

二、實(shí)訓(xùn)原理

牛奶是微生物活動(dòng)的天堂，因此容易腐敗，在適宜的培養(yǎng)基與溫度條件下培養(yǎng)，易觀察并記錄下一定稀釋度的牛奶中的雜菌情況。普通的加熱煮沸，雖然能殺菌，但會(huì)破壞牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分。巴氏消毒法，即將牛奶加熱至62～65℃，維持30min；或加熱至73．8～76．6℃，持續(xù)1～10min，然后迅速冷卻。巴氏消毒法為一種溫和的殺菌方法，既可殺死對(duì)健康有害的病原菌又可使乳質(zhì)盡量少發(fā)生變化。為檢驗(yàn)殺菌效果，將一定稀釋度的牛奶在LB培養(yǎng)基中于大多微生物適宜生長(zhǎng)繁殖的溫度（37℃）下培養(yǎng)，24～48h后觀察雜菌情況。通過(guò)檢測(cè)，可了解消毒前后牛奶中微生物不同的生長(zhǎng)情況。

三、實(shí)訓(xùn)器材

1．樣品

鮮牛奶1瓶。

2．培養(yǎng)基

LB培養(yǎng)基1瓶。

3．器皿

無(wú)菌培養(yǎng)皿4個(gè)，無(wú)菌空試管8支，1mL無(wú)菌吸管8支，5mL無(wú)菌吸管2支。

4．其他

恒溫水浴鍋，無(wú)菌水1瓶。

四、實(shí)訓(xùn)步驟

1．鮮牛奶的雜菌計(jì)數(shù)

（1）搖勻奶樣，用無(wú)菌水稀釋成10^－1、10^－2、10^－3、10^－4的稀釋度。

（2）吸取10^－3、10^－4稀釋度的奶樣各1mL于2個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，迅速將熔化并冷卻至45℃的LB培養(yǎng)基注入皿內(nèi)，搖勻待凝。

（3）37℃培養(yǎng)24～48h后計(jì)數(shù)。

2．消毒后牛奶的雜菌計(jì)數(shù)

（1）取5mL鮮牛奶于試管內(nèi)，置于63℃水浴中保溫30min，取出后立即放入冷水中冷卻。

（2）取出樣品稀釋成10－1、10－2的稀釋度。

（3）吸取10^－1、10^－2稀釋度的奶樣各1mL于2個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，然后注入熔化并冷卻至45℃的LB培養(yǎng)基，迅速搖勻待凝。

（4）37℃培養(yǎng)24～48h后計(jì)數(shù)。

3．注意事項(xiàng)

（1）巴氏消毒時(shí)，一定要等試管內(nèi)鮮牛奶的溫度到達(dá)63℃時(shí)才開(kāi)始計(jì)時(shí)（30min）。

（2）消毒過(guò)程中，要不時(shí)搖動(dòng)一下試管，使溫度均勻。

五、結(jié)果記錄

將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入表3－10中。

表3－10　鮮牛奶消毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果

六、思考題

（1）什么是巴氏消毒法？

（2）巴氏消毒法有何意義？