五、其他熒光免疫技術(shù)

（一）熒光免疫測(cè)定技術(shù)

根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離游離的與結(jié)合的熒光標(biāo)記物，將熒光免疫測(cè)定技術(shù)分為均相熒光免疫測(cè)定和非均相熒光免疫測(cè)定。均相熒光免疫測(cè)定不需要分離，如熒光偏振免疫測(cè)定；非均相熒光免疫測(cè)定則需要分離，如時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定。

1.熒光偏振免疫測(cè)定（flourescence polarization immunoassay，F(xiàn)PIA）　FPIA是一種定量熒光免疫測(cè)定技術(shù)，利用的抗原抗體競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)的原理。根據(jù)熒光素標(biāo)記抗原與其抗原抗體復(fù)合物之間熒光偏振程度的差異，測(cè)定體液中藥物、激素等小分子物質(zhì)的含量。反應(yīng)系統(tǒng)內(nèi)同時(shí)加入待測(cè)抗原和一定量用熒光素標(biāo)記的小分子抗原，使二者與有限量的特異性抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。當(dāng)待測(cè)抗原濃度高時(shí)，大部分抗體被其結(jié)合，而熒光素標(biāo)記的抗原多呈游離的小分子狀態(tài)，在液相中轉(zhuǎn)動(dòng)速度較快，受偏振光激發(fā)后發(fā)射出的偏振熒光就較弱。反之，檢測(cè)到的偏振熒光就越強(qiáng)。故偏振熒光的強(qiáng)弱程度與待測(cè)抗原濃度呈反比關(guān)系。通過檢測(cè)反應(yīng)體系中偏振光的大小，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可以精確地得知樣品中待測(cè)抗原的含量。

2.時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定（time resolved fluorescence immunoassay，TRFIA）　TRFIA是一種非同位素免疫分析技術(shù)，其基本原理是用鑭系元素標(biāo)記抗原或抗體，利用鑭系元素螯合物能發(fā)出長(zhǎng)壽命熒光的特點(diǎn)，延長(zhǎng)測(cè)量時(shí)間，待短壽命的非特異性熒光（各種蛋白、組織成分、試管、儀器組件等在激發(fā)光的作用下發(fā)出的一定強(qiáng)度的熒光）完全衰退后再行測(cè)定，所得信號(hào)完全為長(zhǎng)壽命鑭系螯合物的熒光，從而有效地消除了非特異性熒光的干擾（圖6-5）。用時(shí)間分辨技術(shù)測(cè)量熒光，同時(shí)檢測(cè)波長(zhǎng)和時(shí)間兩個(gè)參數(shù)進(jìn)行信號(hào)分辨，極大地提高了分析的靈敏度和特異性。

圖6-18　時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定原理

（二）免疫芯片技術(shù)

免疫芯片是一種特殊的蛋白質(zhì)芯片，也稱抗體芯片。免疫芯片技術(shù)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性和電子芯片的高密度集成原理相結(jié)合的一種全新的檢測(cè)技術(shù)。其基本原理是將各種蛋白質(zhì)（抗原或抗體）按一定順序高密度地排列在固相載體上，形成檢測(cè)用芯片，與少量的待測(cè)樣品發(fā)生反應(yīng)，樣品中的抗體（或抗原）與固相中的已知抗原（或抗體）同時(shí)產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)，再通過標(biāo)記物示蹤方法即可一次同時(shí)完成數(shù)十種甚至數(shù)萬種抗原或抗體的檢測(cè)。

知識(shí)與技能拓展

免疫芯片技術(shù)的類型與特點(diǎn)

免疫芯片技術(shù)的類型很多，根據(jù)標(biāo)記物的不同，分為熒光免疫芯片、酶標(biāo)免疫芯片、放射性同位素免疫芯片、金標(biāo)免疫芯片等。根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理不同，分為雙抗體夾心法免疫芯片、競(jìng)爭(zhēng)法免疫芯片、間接法免疫芯片等。根據(jù)載體不同，分為固相芯片（平板芯片）和液體芯片（微球芯片）等。免疫芯片有著信息量大、操作簡(jiǎn)便、樣品用量少、用途廣、成本低、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)?？梢杂脽晒?、酶、化學(xué)發(fā)光等顯示結(jié)果，通過相應(yīng)的掃描儀、計(jì)算機(jī)等儀器進(jìn)行檢測(cè)。

臨床上免疫芯片主要應(yīng)用于感染性疾病（病毒性肝炎、結(jié)核等）、心血管疾病、自身免疫性疾病、腫瘤等疾病的檢測(cè)，還可對(duì)病程進(jìn)行監(jiān)控和療效評(píng)價(jià)。除此之外，免疫芯片還可應(yīng)用于藥物學(xué)的研究、流行病學(xué)研究、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品衛(wèi)生檢查等方面。

思考題

1.結(jié)合血液學(xué)知識(shí)，分析流式細(xì)胞技術(shù)在血液病診斷中的重要性。

2.查閱資料，比較免疫芯片技術(shù)優(yōu)于其他熒光免疫技術(shù)的特點(diǎn)。

（伍華穎陸紅）