（一）標(biāo)本的采集與送檢

標(biāo)本的采集與送檢是微生物學(xué)檢查的第一步，方法的正確與否直接影響病原體的檢出率，因此應(yīng)注意下述原則。

1．采集標(biāo)本時(shí)應(yīng)無(wú)菌操作，盡量避免污染；盛放標(biāo)本的容器和培養(yǎng)基應(yīng)預(yù)先進(jìn)行無(wú)菌處理并貼好標(biāo)簽。

2．應(yīng)選擇感染部位或病變明顯的部位采集標(biāo)本，避免周圍組織、器官或分泌物中的雜菌污染。

3．根據(jù)病原體在感染性疾病的不同時(shí)期的體內(nèi)分布和排出部位選擇在最佳時(shí)間采集適宜標(biāo)本。例如，可疑傷寒的病人，在病程的1～2周取血液，2～3周時(shí)則取糞便或尿液送檢。

4．對(duì)于懷疑細(xì)菌感染的標(biāo)本，盡量在抗生素使用前采集，特別是對(duì)抗生素敏感的病原體，如乙型溶血性鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌。

5．檢查病原體的特異性抗體時(shí)，應(yīng)采集急性期和恢復(fù)期雙份血清，只有當(dāng)恢復(fù)期血清抗體效價(jià)比急性期的效價(jià)明顯升高達(dá)4倍或以上時(shí)，方有診斷價(jià)值。

6．標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)送檢。大多數(shù)細(xì)菌標(biāo)本應(yīng)冷藏送檢，但是某些細(xì)菌，如腦膜炎奈瑟菌對(duì)低溫和干燥極其敏感，應(yīng)注意保溫，盡量床旁接種，并預(yù)溫相應(yīng)的培養(yǎng)基。

（二）檢查法

細(xì)菌檢驗(yàn)的一般程序主要包括形態(tài)學(xué)檢查、分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)以及藥物敏感試驗(yàn)等。

1．形態(tài)學(xué)檢查　包括不染色標(biāo)本檢查和染色標(biāo)本檢查，最常用的形態(tài)學(xué)檢查是染色標(biāo)本檢查中的革蘭染色法。其基本過(guò)程是標(biāo)本經(jīng)固定后，先用結(jié)晶紫初染，再用盧格碘液媒染，然后用95%乙醇脫色，最后用石炭酸復(fù)紅稀釋液復(fù)染。此法可將細(xì)菌染成兩大類：不被乙醇脫色仍保留紫色的為革蘭陽(yáng)性菌，被乙醇脫色后復(fù)染成紅色的為革蘭陰性菌。革蘭染色法在醫(yī)學(xué)上具有重要的實(shí)際意義：①鑒別細(xì)菌。將細(xì)菌分成革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌，為細(xì)菌的進(jìn)一步鑒定奠定基礎(chǔ)。②選擇用藥。革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌對(duì)不同抗生素的敏感性不同，大多數(shù)革蘭陽(yáng)性菌對(duì)青霉素、紅霉素等抗生素敏感；而大多數(shù)革蘭陰性菌則對(duì)鏈霉素、氯霉素、慶大霉素等抗生素敏感。③與判定細(xì)菌致病性有關(guān)。大多數(shù)革蘭陽(yáng)性菌主要以外毒素致病；而大多數(shù)革蘭陰性菌則以內(nèi)毒素致病。

2．分離培養(yǎng)　原則上應(yīng)對(duì)所有送檢標(biāo)本做分離培養(yǎng)，以便獲得單個(gè)菌落后進(jìn)行純培養(yǎng)，從而對(duì)細(xì)菌做進(jìn)一步的生物學(xué)、免疫學(xué)、致病性或細(xì)菌的藥物敏感性等方面的檢查，最終做出確切的報(bào)告。

3．生化試驗(yàn)　在得到細(xì)菌純培養(yǎng)物后，用糖發(fā)酵試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)等對(duì)細(xì)菌的酶系統(tǒng)和其代謝產(chǎn)物的檢查，是鑒別細(xì)菌的重要方法之一。

4．血清學(xué)試驗(yàn)　利用含已知的特異性抗體的免疫血清，如志賀菌屬、沙門菌屬的單價(jià)和多價(jià)診斷血清，檢測(cè)未知細(xì)菌的抗原，不僅能對(duì)分離培養(yǎng)的細(xì)菌進(jìn)行種的鑒定，還可以進(jìn)一步對(duì)細(xì)菌進(jìn)行群和型的鑒別。

5．藥物敏感試驗(yàn)　在已確定患者所感染的病原菌后，臨床按常規(guī)用藥又沒(méi)有明顯療效的時(shí)候，有必要做藥物敏感試驗(yàn)（簡(jiǎn)稱藥敏試驗(yàn)），在體外測(cè)定藥物抑制或殺死細(xì)菌的能力，從而指導(dǎo)臨床正確有效地用藥。

（三）抗體的檢測(cè)

病原菌侵入機(jī)體后，其抗原性物質(zhì)能刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體。存在于血液或其他體液中的特異性抗體，常隨病程的進(jìn)展發(fā)生變化。用已知細(xì)菌或其抗原檢測(cè)病人體內(nèi)是否產(chǎn)生了相應(yīng)的特異性抗體及其量的多少，可作為某些病原菌感染的輔助診斷。因須采集病人的血清進(jìn)行此類試驗(yàn)，故稱之為血清學(xué)診斷（serological diagnosis），如輔助診斷傷寒的肥達(dá)試驗(yàn)。