三、酵母RNA的提取

（一）實(shí)驗(yàn)原理

酵母中RNA含量高，可占重量的3％～10％左右，而DNA含量很少，約占重量的0.5％，因此常采用以酵母為原料提取RNA。

根據(jù)制備目的不同，提取RNA的方法很多。工業(yè)上常用的有稀堿法和濃鹽法。稀堿法是用稀堿溶解細(xì)胞壁，其操作簡(jiǎn)單，提取時(shí)間短，但所得產(chǎn)品有不同程度的解聚。濃鹽法是依據(jù)酵母在高濃度鹽溶液中細(xì)胞壁發(fā)生破損，經(jīng)加熱，RNA從細(xì)胞質(zhì)釋放出來，并利用等電點(diǎn)性質(zhì)把其從溶液中沉淀出來。用這兩種方法所得產(chǎn)品RNA已有部分變性，主要作為制備各種核苷酸及核苷的原料。

若需提取接近天然狀態(tài)的RNA，可采用苯酚法或氯仿-異戊醇去蛋白質(zhì)制備RNA。

（二）實(shí)驗(yàn)藥品

1．NaCl（C.P.）；

2．6 mol/L HCl；

3．95％乙醇；

4．無水乙醚。

（三）實(shí)驗(yàn)方法

1．洗滌酵母：取啤酒酵母于4℃下用水洗滌3～4次，經(jīng)3000r/min離心10min得到酵母泥，取20g酵母泥于培養(yǎng)皿中，置于100℃烘箱中烘干，測(cè)定其含水量，一般含水量在80％左右。

2．抽提：控制干酵母粉與食鹽水之比為1∶10（w/w），鹽的最終濃度為8～10％。稱取酵母泥25g（相當(dāng)于干酵母重5g左右）制成相當(dāng)于干酵母重10％的懸浮液，加入20％鹽水20mL，攪拌，放于沸水浴中抽提2h。

3．分離：將抽提液取出迅速冷卻，分裝到離心筒內(nèi)于3000r/min離心30min，使抽提液與菌體殘?jiān)蛛x。

4．沉淀RNA：離心所得上清液，倒入燒杯內(nèi)，置于水浴中冷卻20min，攪拌條件下，小心地用6mol/L HCl調(diào)節(jié)pH值至2.5，在冰浴中靜置20min，使RNA沉淀完全，經(jīng)3000r/min離心15min，得到RNA沉淀，先用95％乙醇洗兩次，每次用10mL，再用無水乙醚洗兩次，每次用10mL。干燥即制得RNA制品。

5．含量測(cè)定：用紫外分光光度法及定磷法測(cè)定制品中RNA的含量，計(jì)算每克干酵母中RNA的量（分別見實(shí)驗(yàn)八中的第三、第四點(diǎn)）。用Folin-酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)的含量（見實(shí)驗(yàn)五中第二點(diǎn)）。

（四）實(shí)驗(yàn)記錄

1．RNA的含量測(cè)定，分別見實(shí)驗(yàn)八中第三、第四點(diǎn)。

2．Folin-酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)的含量，見實(shí)驗(yàn)五中第二點(diǎn)。