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        常用混合固定液

        時間:2023-03-13 理論教育 版權(quán)反饋
        【摘要】: 該固定液是最常用的固定液,能滿足常規(guī)HE及免疫組化、PCR等工作。此固定液配制后應(yīng)密封并保存在陰涼處,保存時間不超過1個月。也常用于糖原及尼氏體的固定,糖原儲積病的標本可用此固定液固定。固定液中的冰醋酸能固定染色質(zhì),苦味酸能使組織適當硬化,甲醛水溶液可調(diào)節(jié)前兩種試劑對組織的膨脹作用。有一定毒性,應(yīng)避免吸入或與皮膚接觸。而對含血量多的組織標本盡量不要選Zenker液固定。

        (一)10%中性緩沖甲醛液

        【試劑】 磷酸二氫鈉(NaH2PO4·H2O)4.0g,磷酸氫二鈉(Na2HPO4)13g,甲醛(37%)120ml,蒸餾水880ml,pH 7.0。

        【適用范圍及特點】 該固定液是最常用的固定液,能滿足常規(guī)HE及免疫組化、PCR等工作。一般無特殊要求的病理標本均適用。

        【使用注意事項】 中性緩沖甲醛溶液是以pH 7.0~7.2的磷酸鹽緩沖液為溶劑配制的,其固定效果及對組織抗原性的保存均優(yōu)于一般的10%甲醛固定液。此固定液配制后應(yīng)密封并保存在陰涼處,保存時間不超過1個月。

        (二)乙醇-甲醛液(A-F液)

        【試劑】 甲醛(37%)100ml,95%乙醇900ml。

        【適用范圍及特點】 該固定液有固定兼脫水作用,固定后的標本可直接入95%乙醇脫水。適用于皮下組織中肥大細胞的固定。

        (三)Carnoy固定液

        【試劑】 無水乙醇60ml,氯仿30ml,冰醋酸10ml。

        【適用范圍及特點】 此液能固定胞質(zhì)和胞核,尤其適宜于染色體的固定,對顯示DNA、RNA的效果較好。也常用于糖原及尼氏體的固定,糖原儲積病的標本可用此固定液固定。但不能保存脂類,不適用于脂肪染色。該固定液可防止乙醇的硬化及收縮作用,增加滲透力,特別適合外膜致密不易透入的組織。以小塊組織快速固定為好,一般固定20~40min,較大塊組織一般不超過3~4h。

        (四)Bouin固定液

        【試劑】 飽和苦味酸水溶液(約1.22%)75ml,甲醛25ml,冰醋酸5ml。

        【適用范圍及特點】 此液為實驗室常用固定劑,對組織固定均勻,適于絕大多數(shù)器官與組織的固定,適用于結(jié)締組織染色,尤其是三色染色時更為理想,染色效果好。固定液中的冰醋酸能固定染色質(zhì),苦味酸能使組織適當硬化,甲醛水溶液可調(diào)節(jié)前兩種試劑對組織的膨脹作用。對脂肪的固定效果好,尤其適用于含脂肪的淋巴結(jié)、乳腺組織和脂肪瘤標本的固定。

        【使用注意事項】 固定液偏酸,pH 3~3.5,對抗原有一定的損害;使組織收縮,不適宜于標本的長期保存。有一定毒性,應(yīng)避免吸入或與皮膚接觸。為了清除固定后組織塊上的黃色,固定后常以70%~80%乙醇反復(fù)洗滌??稍谙礈煲掖贾屑尤肷倭康娘柡吞妓徜囁芤杭铀偾宄M織塊的黃色。

        Bouin液可以用80%乙醇150ml,甲醛水溶液60ml,冰醋酸15ml與結(jié)晶苦味酸1.0g混合配制。此液比Bouin原液滲透力強,固定時間為1d左右,固定后可直接轉(zhuǎn)入95%乙醇。注意:必須在用前配制。

        (五)Zenker固定液

        【試劑】 升汞5.0g,重鉻酸鉀2.5g,蒸餾水100ml。

        以上配成Zenker貯存液,冰醋酸5ml(用時加入)。

        【適用范圍及特點】 Zenker液是一種核固定劑。該液是細胞學(xué)及病理學(xué)常用的固定劑,對細胞核固定最好,最適合于造血和網(wǎng)狀內(nèi)皮組織的固定。也常作為三色染色的組織固定劑,在三色染色中還可作為媒染劑使用。而對含血量多的組織標本盡量不要選Zenker液固定。

        【使用注意事項】

        (1)由于Zenker液中含有氧化汞,固定后常需脫去汞黃色。切片脫蠟后脫汞黃色的方法:①用Lugol碘,5min,水洗;②0.5%硫代硫酸鈉,5min,流水、蒸餾水洗,并按照染色步驟進行染色。

        (2)組織必須用流水沖洗去除重鉻酸鉀否則乙醇脫水時會引起鉻色素沉積。

        (3)Zenker液需要避光保存,以免引起化學(xué)變化而失效。

        (六)Helly液

        【試劑】 重鉻酸鉀2.5g,月升汞5.0g,甲醛5ml,蒸餾水100ml。

        【適用范圍及特點】 Helly液又稱Zenker-Formol液,此液對細胞質(zhì)固定較好,特別適于顯示某些特殊顆粒,尤其對胰島和腦垂體前葉各種細胞的顯示均有良好的效果。此液也用于造血臟器如骨髓、脾、肝等組織的固定,紅細胞可得到良好保存。對心肌的閏盤保存也有良好效果。

        (七)Maximow液

        【試劑】 Zenker儲備液100ml,10%甲醛水溶液10ml。

        【適用范圍及特點】 此液對細胞質(zhì)固定較好,也用于造血臟器(骨髓、脾、肝)等組織的固定。甲醛可增加對酸性染料的親和力,稍有促染細胞質(zhì)的作用。升汞對細胞核的染色較好。

        【使用注意事項】 需脫汞處理。

        (八)Altmann液

        【試劑】 5%重鉻酸鉀水溶液10ml,2%鋨酸水溶液10ml。

        【適用范圍及特點】 為線粒體、脂肪的良好固定劑,固定白細胞顆粒最好。小塊組織固定24h,流水沖洗24h。

        【注意事項】 用時配制。

        (九)Dafano液

        【試劑】 硝酸鈷1.0g,甲醛15ml,蒸餾水100ml。

        【適用范圍及特點】 此液固定高爾基體較好,流水沖洗以后脫水。

        (十)甲醛溴化銨液

        【試劑】 甲醛15ml,溴化銨2.0g,蒸餾水85ml。

        【適用范圍及特點】 此液為腦組織的良好固定劑,可用于鍍銀和鍍金染色。

        (十一)甲醛-醋酸鈉(鈣)-升汞液

        【試劑】 甲醛10ml,醋酸鈉或醋酸鈣2.0g,升汞6.0g,蒸餾水90ml。

        【適用范圍及特點】 此液用時配制,適于固定胰腺組織,對鑒別胰島細胞較好。

        (十二)Kolmer液

        【試劑】 5%重鉻酸鉀水溶液20ml,10%甲醛20ml,冰醋酸5ml,5%三氯醋酸水溶液5ml,10%醋酸鈉水溶液5ml。

        【適用范圍及特點】 由于此液中含有鈉鹽,適用于固定整個眼球及神經(jīng)組織。固定時間為24h。

        (十三)甲醛-生理鹽水

        【試劑】 甲醛10ml,生理鹽水90ml,pH 7.0。

        【適用范圍及特點】 此固定液是應(yīng)用最廣的一種,它可以保護脂類和細胞核。在做酸性染色時,如V-G,或三重染色之前,還可以再使用第2次固定。

        (十四)Mossman液

        【試劑】 甲醛10ml,95%乙醇30ml,冰醋酸10ml,蒸餾水50ml。

        【適用范圍及特點】 此液用于哺乳動物胚胎,它的滲透力很快,兼有脫鈣作用。

        (十五)B-5固定液

        【試劑】

        1.儲備液,以下成分充分混合,作為B-5儲備液。

        氧化汞12.0g,醋酸鈉2.5g,蒸餾水200ml。

        2.工作液,使用前立即混合。

        儲備液20ml,甲醛2.0ml。

        【適用范圍及特點】 B-5固定液是骨髓活檢常規(guī)固定液,并且在懷疑淋巴瘤時固定淋巴結(jié)。

        【使用注意事項】

        (1)B-5儲備液不能使用任何金屬用具或金屬類蓋子,儲備液自配制之日起穩(wěn)定性1年。

        (2)經(jīng)該液固定的標本若長期保存需移入10%甲醛或70%乙醇中固定。

        (3)B-5固定的組織切片含有汞沉淀,染色前常需進行脫汞黃色處理(方法同Zenker固定液)。

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