（一）消毒、滅菌、防腐、無菌及無菌操作

1．消毒 消除或殺滅外環(huán)境中病原微生物及其他有害微生物的過程。

2．滅菌 用物理或化學(xué)的方法消除或殺滅物體上所有微生物（包括病原微生物、非病原微生物、細(xì)菌繁殖體和芽胞）的方法。滅菌的要求是把微生物存活的概率降低到最低限度。

3．防腐 防止和抑制細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法。

4．無菌 物體上不含活菌。

5．無菌操作 防止微生物進(jìn)入機(jī)體或其他物品的操作技術(shù)。

（二）物理因素對(duì)細(xì)菌的影響

1．溫度

（1）高溫。因熱力作用細(xì)菌活性消失，代謝發(fā)生障礙導(dǎo)致細(xì)菌死亡。多數(shù)無芽胞細(xì)菌55～60℃，30～60min即被殺死；100℃立即死亡，有芽胞的破傷風(fēng)芽胞梭菌需煮沸3h才被殺死。分為濕熱和干熱兩種。濕熱：①巴氏消毒法：61．1～62．8℃，30min或者71．7℃15～30s，主要用于牛乳消毒；②煮沸法：煮沸100℃，5min中可殺死細(xì)菌繁殖體，如水中加入2%碳酸鈉，則可提高沸點(diǎn)至105℃，既殺死芽胞，又防止金屬器皿生銹；③流通蒸汽滅菌法：100℃水蒸氣消毒10～30min細(xì)菌繁殖體被殺死，對(duì)芽胞的作用不大；④間歇滅菌法：可殺死芽胞又使不耐高溫物質(zhì)免受影響；⑤加壓蒸汽滅菌法：通常在103．4kPa的壓力下達(dá)121．3℃，維持15～20min可殺滅所有細(xì)菌芽胞和繁殖體，適用于耐高溫、耐濕物品的滅菌，如普通培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等。干熱：①燒灼：微生物實(shí)驗(yàn)室使用的接種環(huán)、接種針、瓶口和試管口常用；②干烤：在密閉干烤箱內(nèi)加溫至160～170℃維持2h，適用于高溫下不變質(zhì)、不損壞、不蒸發(fā)的物品，如一般玻璃器皿、注射器、瓷器。

（2）低溫。在低溫條件下，細(xì)菌代謝活動(dòng)降低不再繁殖，能較長(zhǎng)時(shí)間維持生命，故常用于保存菌種。冷凍真空干燥法是目前保存菌種的最好方法。

2．日光和紫外線 發(fā)揮殺菌作用的日光主要是紫外線，波長(zhǎng)265～266nm時(shí)殺菌作用最強(qiáng)。人工紫外線用低壓水銀蒸汽燈產(chǎn)生，照射的能量以單位時(shí)間內(nèi)每平方厘米的微瓦數(shù)（μW）計(jì)算。紫外線常用于空氣消毒。

3．電離輻射 微生物體中的水受電離照射后，產(chǎn)生自由基及自由基離子破壞微生物的核酸、酶和蛋白質(zhì)致微生物死亡，適用于不耐熱物品的滅菌。如X線、γ射線、高速電子等。

4．超聲波 超聲波通過液體時(shí)發(fā)生的空腔化作用破壞了原生質(zhì)的膠體狀態(tài)，導(dǎo)致細(xì)菌死亡。一般用于細(xì)胞的粉碎以提取細(xì)胞組分和抗原制備。

5．濾過除菌 濾過是以物理阻留方法將液體或空氣中的微生物除去。所用的器具為濾器。過濾法用于不耐高溫物品滅菌，如血清、抗毒素、抗生素等，超靜工作臺(tái)和層流室空氣也用濾過法除菌。目前常用的有薄膜濾器。用于除菌的濾膜孔徑為0．22μm。

6．干燥 干燥引起細(xì)菌脫水、蛋白質(zhì)變性和鹽類濃縮，妨礙細(xì)菌的代謝、生長(zhǎng)、繁殖而引起細(xì)菌死亡。各種細(xì)菌對(duì)干燥的抵抗力不同，芽胞抵抗力最大。

（三）常用消毒劑的殺菌機(jī)制和種類

1．殺菌機(jī)制 ①使菌體蛋白變性或沉淀，如酚類（高濃度）、醇類、醛類、重金屬鹽類（高濃度）、酸堿類等；②干擾微生物酶系統(tǒng)和影響其代謝活動(dòng)，如氧化劑、低濃度重金屬鹽類；③損傷細(xì)胞膜，如酚類（低濃度）、表面活性劑等。

2．種類 ①氧化劑：過氧乙酸、過氧化氫、高錳酸鉀等；②酚類：來蘇、石炭酸、六氯酚等；③烷化劑：環(huán)氧乙烷、環(huán)氧丙烷、溴化甲烷、乙型丙內(nèi)酯等；④表面活性劑：新潔爾滅、消毒凈、杜滅芬等；⑤其他：醇類、醛類、鹵素及化合物、重金屬鹽、染料及酸堿類。

（四）消毒滅菌效果的影響因素及監(jiān)測(cè)

1．影響因素 ①消毒劑的性質(zhì)、濃度和作用時(shí)間：同一種消毒劑的濃度愈高，作用時(shí)間愈長(zhǎng)，殺菌效果愈好。但乙醇以70%左右濃度的消毒效果最好；②微生物的種類和數(shù)量：不同細(xì)菌對(duì)消毒劑抵抗力不同，幼齡菌對(duì)消毒劑比較敏感；③溫度和酸堿度：升高溫度可提高消毒劑的效果。各種不同消毒劑所需最適pH與消毒劑性質(zhì)有關(guān)；④環(huán)境中的有機(jī)物及拮抗物質(zhì)：物體表面或環(huán)境中的有機(jī)物與化學(xué)消毒劑的活性基團(tuán)結(jié)合減弱其殺菌能力；⑤其他：包括濕度、穿透力、表面張力及拮抗物質(zhì)等。

2．監(jiān)測(cè) 各種理化因素對(duì)細(xì)菌消毒滅菌的效果常需用某些指標(biāo)加以監(jiān)測(cè)。常用生物指標(biāo)為：①監(jiān)測(cè)壓力滅菌器用嗜熱脂肪芽胞桿菌；②紫外線殺菌效果監(jiān)測(cè)則用枯草芽胞桿菌黑色變種。