1．檢驗(yàn)?zāi)康?/p>

腦脊液常規(guī)檢查對(duì)許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病及某些神經(jīng)系統(tǒng)疾病及并發(fā)癥的診斷、鑒別診斷、療效觀察及預(yù)后判斷具有參考價(jià)值。

2．檢測(cè)原理

一般性狀檢查采用目測(cè)法；蛋白定性試驗(yàn)采用Pandy法（腦脊液中的球蛋白與飽和石炭酸結(jié)合，可形成不溶性蛋白鹽而下沉產(chǎn)生白色渾濁或沉淀）；細(xì)胞學(xué)檢查采用顯微鏡手工檢查法。

3．性能參數(shù)

腦脊液常規(guī)檢查是人工試驗(yàn)，目前還沒(méi)有試驗(yàn)性能指標(biāo)。

4．標(biāo)本

4.1 腦脊液標(biāo)本由臨床醫(yī)生進(jìn)行腰椎穿刺采集，必要時(shí)可從小腦延腦池或側(cè)腦室穿刺獲得。第一管作細(xì)菌學(xué)檢查，第二管作化學(xué)或免疫學(xué)檢查，第三管作常規(guī)檢查。

4.2 標(biāo)本采集后要立即送檢，因?yàn)榉胖脮r(shí)間過(guò)久，其性質(zhì)可能發(fā)生改變，可能影響檢驗(yàn)結(jié)果。采集的腦脊液標(biāo)本應(yīng)盡量避免混入血液。

5．設(shè)備和試劑

5.1 儀器：OLYMPUS公司的BH-2顯微鏡。

5.2 試劑：5%石炭酸溶液；冰醋酸。

5.3 設(shè)備：Vetri-plast一次性計(jì)數(shù)板。

6．容器和添加劑

腦脊液常規(guī)檢查試驗(yàn)的容器為消毒的玻璃試管，一般情況下無(wú)任何添加劑（如遇高蛋白標(biāo)本時(shí)，可用EDTA鹽抗凝）。

7．校準(zhǔn)步驟

腦脊液常規(guī)檢查是手工試驗(yàn)，不需要此步驟。

8．操作步驟

8.1 檢驗(yàn)申請(qǐng)單及標(biāo)本的審核　整理腦脊液常規(guī)檢驗(yàn)申請(qǐng)單及糞便標(biāo)本，審核合格后，對(duì)腦脊液檢驗(yàn)申請(qǐng)單姓名和標(biāo)本標(biāo)識(shí)進(jìn)行復(fù)查，確認(rèn)一致后進(jìn)行檢測(cè)。

8.2 一般性狀檢查　腦脊液的顏色和透明度測(cè)量采用目測(cè)法。

8.3 潘氏（Pandy）定性試驗(yàn)

8.3.1 取5%石炭酸溶液2～3 ml置于小試管內(nèi)，用滴管滴入腦脊液1～2滴，襯以黑背景，立即觀察結(jié)果。

8.3.2 結(jié)果判斷：陰性，清晰透明，不顯霧狀；弱陽(yáng)性，微呈白霧狀，在黑色背景下才能看到；陽(yáng)性，有明顯白色渾濁或濃絮狀沉淀；強(qiáng)陽(yáng)性，有白色絮狀物凝塊。

8.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)

8.4.1 細(xì)胞總數(shù)　對(duì)澄清的腦脊液混勻后用滴管直接滴入一次性計(jì)數(shù)板，用低倍鏡計(jì)數(shù)全部方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)；渾濁或帶血的腦脊液可用細(xì)胞稀釋液或者生理鹽水稀釋混勻后滴入一次性計(jì)數(shù)板內(nèi)，用低倍鏡計(jì)數(shù)全部方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)。

8.4.2 白細(xì)胞計(jì)數(shù)　小試管內(nèi)放入冰乙酸1～2滴，轉(zhuǎn)動(dòng)試管使內(nèi)壁粘有冰乙酸后傾之，然后滴加混勻的腦脊液3～4滴，數(shù)分鐘后，混勻充入一次性計(jì)數(shù)池內(nèi)，用低倍鏡計(jì)數(shù)全部方格內(nèi)白細(xì)胞數(shù)。

8.4.3 白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)

直接分類(lèi)法：如果白細(xì)胞數(shù)不超過(guò)20×106/L，可不分類(lèi)計(jì)數(shù)；如超過(guò)20×106/L應(yīng)分類(lèi)計(jì)數(shù)。在高倍鏡下根據(jù)細(xì)胞核的形態(tài)分別計(jì)數(shù)單核細(xì)胞（包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）與多核細(xì)胞，計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，以百分比表示。

染色分類(lèi)法：如直接分類(lèi)不易區(qū)分細(xì)胞時(shí)，可將腦脊液沉淀，取沉淀物2滴，推片制成均勻薄膜，置室溫或37℃溫箱內(nèi)待干，進(jìn)行瑞氏染色用油鏡分類(lèi)。如見(jiàn)有不能分類(lèi)的細(xì)胞，應(yīng)另行描述報(bào)告，如腦膜白血病或腫瘤時(shí)。

8.5 檢驗(yàn)結(jié)果的輸入

8.5.1 打開(kāi)電腦，啟動(dòng)“檢驗(yàn)程序”，輸入用戶名及口令后，進(jìn)入檢驗(yàn)程序。

8.5.2 單擊“檢驗(yàn)”菜單，選擇“檢驗(yàn)結(jié)果錄入\修改”，進(jìn)行檢驗(yàn)結(jié)果的錄入及修改。通過(guò)申請(qǐng)序號(hào)進(jìn)行結(jié)果的輸入，選擇“工作單號(hào)”，同時(shí)輸入當(dāng)前患者的樣品“采集時(shí)間”和“接收時(shí)間”，輸入檢驗(yàn)結(jié)果，并逐項(xiàng)對(duì)患者以前腦脊液常規(guī)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行歷史回顧，觀察變化趨勢(shì)。

8.6 檢驗(yàn)結(jié)果的確認(rèn)

檢驗(yàn)結(jié)果的確認(rèn)應(yīng)由主管技師（主治醫(yī)師）或?qū)I(yè)負(fù)責(zé)人進(jìn)行確認(rèn)，方法為單擊“結(jié)果處理”菜單，選擇“報(bào)告確認(rèn)”進(jìn)入結(jié)果確認(rèn)，通過(guò)選擇“工作單元”、“報(bào)告日期”、“單張”或“批量”后，按“提取”鍵提取檢測(cè)結(jié)果，逐一按檢驗(yàn)結(jié)果記錄核對(duì)，按“確認(rèn)”鍵進(jìn)行確認(rèn)。

8.7 檢測(cè)完標(biāo)本的處理

8.7.1 腦脊液標(biāo)本檢驗(yàn)完畢后，加塞后應(yīng)放室溫保存24 h。

8.7.2 經(jīng)腦脊液標(biāo)本污染的各種廢物按《廢物處理制度》進(jìn)行處理。

9．質(zhì)量控制措施

由于腦脊液常規(guī)檢查目前還以手工操作為主，受操作者個(gè)人因素的影響和技術(shù)條件的限制，變異較大，不易標(biāo)準(zhǔn)化，因此這就要求檢驗(yàn)人員受過(guò)專(zhuān)門(mén)培訓(xùn)、技術(shù)過(guò)硬，且有高度責(zé)任心，嚴(yán)格按照操作程序進(jìn)行，確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

10．干擾因素

標(biāo)本送檢必須及時(shí)，收到標(biāo)本后應(yīng)立即檢驗(yàn)，以免腦脊液凝固或細(xì)胞破壞使結(jié)果不準(zhǔn)確。標(biāo)本必須混勻后方可充池，否則影響計(jì)數(shù)結(jié)果。

因穿刺損傷血管，引起血性腦脊液，白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果必須校正，以剔除因出血而帶來(lái)的白細(xì)胞。校正方法：每升腦脊液內(nèi)白細(xì)胞數(shù)=每升腦脊液內(nèi)白細(xì)胞未校正數(shù)-（每升腦脊液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)×每升血液內(nèi)白細(xì)胞數(shù)÷每升血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)）。

白細(xì)胞計(jì)數(shù)試管中的冰乙酸要盡量去除，否則結(jié)果偏低。若標(biāo)本陳舊、細(xì)胞變形時(shí)，白細(xì)胞直接分類(lèi)法誤差太大，推薦用涂片染色分類(lèi)法分類(lèi)計(jì)數(shù)。涂片染色分類(lèi)法計(jì)數(shù)時(shí)，離心速度不能太快，否則細(xì)胞形態(tài)受影響，有條件的單位可用玻片離心沉淀法、細(xì)胞室沉淀法等收集細(xì)胞。涂片固定時(shí)間不能太長(zhǎng)，更不能高溫固定，以免細(xì)胞皺縮。

腦脊液蛋白定性試驗(yàn)時(shí)，由于Pandy試驗(yàn)靈敏度高，故部分正常腦脊液可出現(xiàn)弱陽(yáng)性結(jié)果；石炭酸不純可引起假陽(yáng)性；室溫低于10℃石炭酸飽和度降低可引起假陰性。

11．結(jié)果計(jì)算及測(cè)量不確定度

腦脊液常規(guī)檢查是一個(gè)手工操作試驗(yàn)，目前不需要測(cè)量不確定度。

測(cè)量不確定度的來(lái)源包括標(biāo)本、標(biāo)本采集過(guò)程、送檢時(shí)間、保存條件、藥物、試劑狀況、員工素質(zhì)等因素。

12．生物參考區(qū)間

正常人腦脊液為無(wú)色透明；蛋白定性試驗(yàn)為陰性；細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)紅細(xì)胞，僅有少量白細(xì)胞，成人：（0～8）×106/L；兒童：（0～15）×106/L；嬰兒：（0～20）×106/L。多為淋巴細(xì)胞及大單核細(xì)胞，兩者之比約為7∶3，偶見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞。

13．患者檢驗(yàn)結(jié)果可報(bào)告區(qū)間

腦脊液常規(guī)檢查患者結(jié)果可報(bào)告區(qū)間：顏色，無(wú)色、黃色、紅色、白色或灰白色、綠色及褐色或黑色；透明度，清晰透明、微濁及渾濁；蛋白定性，陰性、弱陽(yáng)性及陽(yáng)性；細(xì)胞計(jì)數(shù)：（0～××）×106/L；細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)：0～1.00。

14．警告/危急值

腦脊液常規(guī)檢查無(wú)警告/危急值。

15．實(shí)驗(yàn)室解釋

15.1 腦脊液顏色

紅色見(jiàn)于腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血、出血性腦膜炎、穿刺性損傷。黃色見(jiàn)于陳舊性出血、腦腫瘤、重癥黃疸或胡蘿卜素血癥。白色米湯樣見(jiàn)于化膿性腦膜炎；白色毛玻璃樣見(jiàn)于結(jié)核性或真菌性腦膜炎。綠色見(jiàn)于綠膿桿菌、肺炎鏈球菌、甲型鏈球菌引起的腦膜炎。褐色或黑色見(jiàn)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)黑色素細(xì)胞瘤。

15.2 腦脊液蛋白定性檢驗(yàn)

蛋白定性陽(yáng)性見(jiàn)于：①神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病如化膿性腦膜炎、結(jié)核性腦膜炎時(shí)明顯增高，病毒性腦膜炎、流行性乙型腦炎、瘡疹病毒性腦炎輕度增高。②顱內(nèi)和蛛網(wǎng)膜下腔出血如高血壓合并動(dòng)脈硬化、腦血管畸形、動(dòng)脈瘤、血液?。ò籽　⒃偕系K性貧血、血小板減少性紫癜和血友病）。③蛛網(wǎng)膜下腔梗阻致脊髓壓迫癥，如脊髓腫瘤、肉芽腫、硬膜外膿腫、粘連性脊髓蛛網(wǎng)膜炎、脊椎結(jié)核、椎間盤(pán)脫出等可造成椎管的部分或完全性梗阻。

15.3 腦脊液細(xì)胞計(jì)數(shù)

細(xì)胞增高見(jiàn)于：①細(xì)菌性腦膜炎：細(xì)胞總數(shù)可顯著升高，以中性粒細(xì)胞為主。②結(jié)核性腦膜炎：細(xì)胞總數(shù)可升高，一般情況下不超過(guò)500×106/L，在起病初期，以中性粒細(xì)胞增高為主，但很快下降；后期以淋巴細(xì)胞增高為主；中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞同時(shí)存在是結(jié)核性腦膜炎的特點(diǎn)。③病毒性腦膜炎：細(xì)胞總數(shù)輕度升高，以淋巴細(xì)胞為主，但其中流行性乙型腦炎以中性粒細(xì)胞為主。④真菌性腦膜炎：細(xì)胞總數(shù)可輕度升高，早期以中性粒細(xì)胞增高為主，后期以淋巴細(xì)胞為主。⑤寄生蟲(chóng)腦?。嚎梢?jiàn)較多的嗜酸性粒細(xì)胞。⑥中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤：細(xì)胞總數(shù)可正?；蜉p度增高，以淋巴細(xì)胞為主，有時(shí)可見(jiàn)腫瘤細(xì)胞。⑦腦室及蛛網(wǎng)膜下腔出血及出血性腦炎，可出現(xiàn)均勻性的血性腦脊液，除血細(xì)胞大量增加外，在腦脊液中也出現(xiàn)周?chē)械母鞣N血細(xì)胞，其中大多以中性粒細(xì)胞為主。

15.4 影響腦脊液檢驗(yàn)結(jié)果的因素較多，請(qǐng)臨床結(jié)合患者病情及其他檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)本次檢驗(yàn)結(jié)果綜合分析，正確對(duì)待每一項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果。如腦脊液蛋白定性試驗(yàn)時(shí)，由于Pandy試驗(yàn)靈敏度高，故部分正常腦脊液可出現(xiàn)弱陽(yáng)性結(jié)果，因此，要結(jié)合腦脊液蛋白定量綜合分析才能得出正確判斷。

16．安全防護(hù)措施

16.1 實(shí)驗(yàn)室及工作人員一般安全防護(hù)措施見(jiàn)《實(shí)驗(yàn)室安全管理程序》。

16.2 腦脊液標(biāo)本的運(yùn)送都必須加蓋，防止溢出。標(biāo)本溢出后，由工作人員立即用75%酒精或0.2%過(guò)氧乙酸溶液對(duì)污染的環(huán)境進(jìn)行消毒。

16.3 如果操作人員的皮膚或衣物上沾到了腦脊液或試劑，應(yīng)立即用75%酒精或0.2%過(guò)氧乙酸溶液消毒處理，再用肥皂水、清水進(jìn)行沖洗。如果眼睛中濺入腦脊液或試劑，用大量的清水沖洗并采取必要的醫(yī)療措施。

16.4 對(duì)突發(fā)傳染性疾病的腦脊液標(biāo)本的防護(hù)應(yīng)啟動(dòng)特殊的安全防護(hù)程序。

17．變異的潛在來(lái)源

腦脊液標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，放置過(guò)久可因細(xì)胞破壞或細(xì)胞包裹于纖維蛋白凝塊中導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)降低及分類(lèi)不準(zhǔn)。

18．報(bào)告時(shí)間

腦脊液常規(guī)檢測(cè)報(bào)告時(shí)間為4 h；急診標(biāo)本以優(yōu)先的原則，門(mén)診急診腦脊液常規(guī)30 min；住院患者急診常規(guī)1 h。

19．參考文獻(xiàn)

[1] 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜．全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程．3版．南京：東南大學(xué)

出版社，2007．