血清學(xué)水平的檢測(cè)
血清學(xué)水平檢測(cè)指的是通過(guò)采集血液標(biāo)本進(jìn)行TM測(cè)定,其突出的優(yōu)點(diǎn)是可以反復(fù)采樣及反復(fù)檢測(cè),較組織細(xì)胞TM只能通過(guò)病理切片的特殊染色來(lái)完成,血清學(xué)檢測(cè)更適合臨床確定診斷和跟蹤觀察的需要。
血清學(xué)水平檢測(cè)還通過(guò)B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)的應(yīng)用,制備出多種抗腫瘤的單克隆抗體(McAbs),所以,凡McAbs所針對(duì)的抗原(均為腫瘤相關(guān)抗原),都可用此法得到檢測(cè)。但這些McAbs檢測(cè)試劑的敏感性和特異性還都不十分理想。不過(guò),臨床實(shí)踐提示,只要合理應(yīng)用,并與其他診斷手段所得的資料進(jìn)行綜合分析,對(duì)于確定診斷、觀察治療效果與監(jiān)測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,能夠起到輔助作用,尤其在判斷復(fù)發(fā)中,可較影像學(xué)檢查提前半年至一年,甚至一年半。
傳統(tǒng)的血清學(xué)檢測(cè)方法為酶免疫測(cè)定(EIA)(后來(lái)改進(jìn)為酶聯(lián)免疫分析,ELISA)和放射免疫測(cè)定(RIA)方法,二者都是利用抗體和抗原的特異性結(jié)合的特點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定,即應(yīng)用制備好的特異性抗原或抗體作為試劑,以檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)的抗體或抗原。它的特點(diǎn)是具有高度的特異性和敏感性。如將抗原或抗體用可以微量檢測(cè)的標(biāo)志物(例如放射性核素、熒光素、酶等)進(jìn)行標(biāo)志,則與標(biāo)本中相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)后,可以不必測(cè)定抗原抗體復(fù)合物本身,而測(cè)定復(fù)合物中的標(biāo)志物,通過(guò)標(biāo)志物的放大作用進(jìn)一步提高免疫技術(shù)的敏感性。這就是免疫組化技術(shù)(immunohistochemical telchnique)。這一技術(shù)還可用于組織切片或其他標(biāo)本中抗原或抗體的定位。因?yàn)樗脴?biāo)志物不同而出現(xiàn)不同的命名,如以熒光素為標(biāo)志物的檢測(cè)就叫熒光免疫測(cè)定(FIA)。
EIA的敏感度與RIA相仿,但信噪比的范圍遠(yuǎn)遠(yuǎn)不及后者,這是RIA的突出優(yōu)點(diǎn)。RIA卻因受到放射性核素半衰期的限制,標(biāo)志物應(yīng)用時(shí)間短,操作者還需有嚴(yán)密的防護(hù)措施,這就影響了RIA的使用,而酶標(biāo)志物的保存期可長(zhǎng)達(dá)2年以上,所以一般檢測(cè)單位都采用EIA。但RIA的上述突出優(yōu)點(diǎn),至今有的單位仍保留使用。
放射免疫學(xué)的范圍內(nèi),在酶免疫檢測(cè)的基礎(chǔ)上,出現(xiàn)發(fā)光免疫分析法。這是將發(fā)光分析和免疫反應(yīng)結(jié)合而建立的一種新的超微量分析技術(shù),根據(jù)發(fā)光反應(yīng)的不同體系和標(biāo)志物、標(biāo)記方法,可分為:①化學(xué)發(fā)光反應(yīng)分析(CLIA):以化學(xué)發(fā)光物標(biāo)記抗原或抗體,免疫反應(yīng)后直接引發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè);②化學(xué)發(fā)光酶免疫反應(yīng)(CLEIA):用參與某一發(fā)光反應(yīng)的酶標(biāo)記抗原或抗體,免疫反應(yīng)后加入發(fā)光試驗(yàn),測(cè)定發(fā)光體系的發(fā)光強(qiáng)度,以測(cè)定抗原或抗體;③生物發(fā)光免疫檢測(cè)(BLIA):利用生物發(fā)光物質(zhì)或參與生物發(fā)光反應(yīng)的輔助因子標(biāo)記抗原或抗體,免疫反應(yīng)后用生物發(fā)光反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè);④電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)分析(ECLIA):是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的化學(xué)反應(yīng),包括電化學(xué)和發(fā)光兩個(gè)過(guò)程。
FIA曾經(jīng)是一種先進(jìn)的技術(shù)。開(kāi)始時(shí)使用經(jīng)熒光素標(biāo)記后的抗體與組織細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng),可在熒光顯微鏡下檢查抗原表達(dá)的部位;后來(lái)通過(guò)流式細(xì)胞儀(fluow cytometry)進(jìn)行細(xì)胞周期時(shí)相和倍體分析;再后來(lái),與單克隆抗體結(jié)合,可對(duì)細(xì)胞的表型進(jìn)行分析,以得到有關(guān)抗原在單個(gè)細(xì)胞上量的表達(dá)信息。一種名為細(xì)胞微球試驗(yàn)(CBA)的新流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù),可利用包裹了特定抗體的熒光微球去捕獲各種體液內(nèi)的脫落細(xì)胞、細(xì)胞分泌或裂解所釋放的細(xì)胞因子和可溶性蛋白,通過(guò)流式細(xì)胞儀確定,利用此法可為白血病、淋巴瘤等多種疾病的診斷提供快速、靈敏的檢測(cè)。
放射免疫顯像(RII)是以放射性核素標(biāo)記抗腫瘤單克隆抗體,將此標(biāo)記抗體注入患者體內(nèi),用示蹤系統(tǒng)獲取與抗體結(jié)合后的腫瘤細(xì)胞分布情況,這一技術(shù)還被用于手術(shù)中,以此跟蹤指導(dǎo)切除部位的范圍,從而出現(xiàn)了放射免疫導(dǎo)向手術(shù)(RIGS)的新技術(shù)。
自20世紀(jì)90年代以來(lái),國(guó)際上許多公司不斷推出各種自動(dòng)化的免疫分析系統(tǒng),在抗原-抗體的基本原理下,運(yùn)用了各種先進(jìn)技術(shù),有微粒子熒光偏振、化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光以及時(shí)間分辨熒光等。這些設(shè)備簡(jiǎn)易、方便,穩(wěn)定,減少操作中的人為誤差。
目前,在國(guó)內(nèi)主要有3類(lèi)全自動(dòng)免疫化學(xué)分析系統(tǒng)(化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)、熒光免疫分析系統(tǒng)和電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)),廣泛地應(yīng)用于臨床,對(duì)血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)具有快速、準(zhǔn)確、半定量等功能。可檢測(cè)的TM有:AFP、CEA、CA19-9、CA72-4、CA125、CA15-3、NSE、Cyfra21-1、PSA、fPSA等血清及血漿標(biāo)本的檢測(cè),是臨床上應(yīng)用最廣的檢測(cè)手段。
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