Lowry法又稱Folin-酚試劑法，是較早發(fā)展的一種靈敏的檢測方法。所用的試劑是由兩部分組成的：一部分相當于雙縮脲試劑，可與蛋白質(zhì)中的肽鍵起呈色反應(yīng)；另一部分為Folin-酚試劑，在堿性條件下極不穩(wěn)定，易被酚類化合物還原而呈藍色。由于蛋白質(zhì)中含有帶酚羥基的酪氨酸，故有此呈色反應(yīng)。

此法的優(yōu)點是靈敏度高，缺點是費時較長，要精確控制操作時間，標準曲線不是嚴格的直線形式，且專一性差，干擾物質(zhì)較多。

【材料】

1．試劑

（1）牛血清白蛋白標準液（200μg/ml）：準確稱取牛血清白蛋白粉末50.0mg，用0.1mol/L NaOH溶液潤濕溶解，加蒸餾水到250ml。

（2）堿性硫酸銅溶液

①堿溶液：Na2CO3 2g溶于100ml 0.1mol/L NaOH中。

②硫酸銅溶液：CuSO4?5H2O 0.5g溶于100ml 35mmol/L（1%）酒石酸鉀鈉中。

使用前將①與②按50∶1混合即成堿性硫酸銅溶液。使用時新鮮配制。

（3）Folin-酚試劑：在2L磨口回流裝置內(nèi)加入鎢酸鈉（Na2WO4?2H2O）100g，鉬酸鈉（Na2MoO4?2H2O）25g，水700ml，14.68mol/L（85%）磷酸50ml，濃鹽酸100ml，充分混合后用小火回流10h。冷卻后，再加硫酸鋰（Li2SO4?H2O）150g，水50ml，數(shù)滴（2～3滴）液體溴（也可用30%H2O2 6～8滴代替），然后開口沸騰15min，去除過量的溴（因溴氣甚毒，這一步應(yīng)在通風櫥中進行），冷卻后加水至1 000ml，過濾，溶液呈黃色（如帶綠色則不能用），保存于棕色瓶中置冷暗處備用（如配制時間較長，試劑轉(zhuǎn)呈綠色，可再加液體溴數(shù)滴，煮沸15min，若能恢復原有的黃色或金黃色仍可繼續(xù)使用）。

（4）蛋白質(zhì)樣品：血清，使用前稀釋約100倍（表12-1）。

2．設(shè)備 恒溫水浴箱、分光光度計。

表12-1 蛋白標準物及樣品 的稀釋表（ml）

【操作步驟】

【計算】

1. 繪制標準曲線 以吸光度值為縱坐標，牛血清白蛋白標準液質(zhì)量濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

2. 計算樣品蛋白質(zhì)濃度 將血清樣品的吸光度值在標準曲線上查出相應(yīng)的標準牛血清白蛋白溶液的質(zhì)量濃度，再折算成每毫升血清稀釋液含蛋白質(zhì)的微克數(shù)，然后乘以稀釋倍數(shù)，得出每毫升未稀釋血清含蛋白質(zhì)的克數(shù)，即每毫升血清中含蛋白質(zhì)的克數(shù)。