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        細(xì)菌感染檢測

        時(shí)間:2023-04-14 理論教育 版權(quán)反饋
        【摘要】:引起人類致病的病原體約有數(shù)百種以上,而細(xì)菌感染所致的疾病占首位。細(xì)菌引起的感染可分為外源性和內(nèi)源性感染兩種類型。因此,根據(jù)臨床細(xì)菌感染發(fā)生的變化趨勢,建立準(zhǔn)確、快速的檢測方法,有利于提高臨床醫(yī)生對細(xì)菌感染疾病的早期診斷、調(diào)整用藥方案、降低疾病死亡率等。

        感染是病原體與宿主在一定條件下相互作用而發(fā)生的一種病理過程。凡由病原體侵入人體所致的疾病,統(tǒng)稱感染性疾?。╥nfection diseases)。感染的病原體包括細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲、支原體、衣原體、螺旋體等。引起人類致病的病原體約有數(shù)百種以上,而細(xì)菌感染所致的疾病占首位。凡能引起人類疾病的細(xì)菌,統(tǒng)稱為病原菌或致病菌(pathogenic bacterium)。細(xì)菌在人體內(nèi)寄生、增殖并引起疾病的特性稱為細(xì)菌的致病性或病原性(pathogenicity)。致病性是細(xì)菌種的特征之一。

        細(xì)菌(bacterum)為原核細(xì)胞型(prokaryotic cell type)微生物,形狀細(xì)短,結(jié)構(gòu)簡單,主要由細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)體等部分構(gòu)成,無典型的細(xì)胞核(無核膜和核仁),有的細(xì)菌還有莢膜、鞭毛、菌毛等特殊結(jié)構(gòu),不進(jìn)行有絲分裂。絕大多數(shù)細(xì)菌的直徑大小在0.5~5μm??筛鶕?jù)形狀分為三類,即球菌(coccus)、桿菌(bacillus)和螺形菌(spirillar bacterium)。還有一種利用細(xì)菌的生活方式來分類,分為兩大類:自養(yǎng)菌和異養(yǎng)菌,其中異養(yǎng)菌包括腐生菌和寄生菌。廣義的細(xì)菌也包括放線菌、螺旋體、立克次體、支原體和衣原體等微生物。細(xì)菌是在自然界分布最廣、個(gè)體數(shù)量最多的有機(jī)體,是大自然物質(zhì)循環(huán)的主要參與者。

        細(xì)菌引起的感染可分為外源性和內(nèi)源性感染兩種類型。內(nèi)源性感染是人體內(nèi)正常菌群中的細(xì)菌,如大腸埃希菌、腸球菌、某些真菌等在一定條件下引起的感染:①由于機(jī)體的防御功能減弱,引起自身感染。例如皮膚黏膜受傷(特別是大面積燒傷)、身體受涼、過度疲勞、長期消耗性疾病等,可導(dǎo)致正常菌群的自身感染。②由于正常菌群寄居部位的改變,發(fā)生了定位轉(zhuǎn)移,也可引起感染性疾病。如下呼吸道、腹膜、泌尿道等感染。內(nèi)源性感染的細(xì)菌可稱為條件致病菌。外源性感染是由于外界細(xì)菌侵入人體,如志賀菌、結(jié)核分枝桿菌等引起的感染。

        隨著社會進(jìn)步和臨床醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展,條件致病菌引起的感染、醫(yī)院感染不斷地增加,新的細(xì)菌、多重耐藥菌引起的感染陸續(xù)出現(xiàn),以前的感染性疾病(如淋病、結(jié)核等)又重新流行。使得臨床對這些疾病的診斷治療出現(xiàn)了一定的困難。因此,根據(jù)臨床細(xì)菌感染發(fā)生的變化趨勢,建立準(zhǔn)確、快速的檢測方法,有利于提高臨床醫(yī)生對細(xì)菌感染疾病的早期診斷、調(diào)整用藥方案、降低疾病死亡率等。細(xì)菌感染傳統(tǒng)的檢測方法主要包括涂片、分離培養(yǎng)、鑒定等,由于細(xì)菌在分離培養(yǎng)過程中需要一定的時(shí)間進(jìn)行細(xì)菌的純培養(yǎng),鑒定也需要固定的時(shí)間,因此出報(bào)告的時(shí)間較慢,很多時(shí)候不能滿足臨床診斷治療的需要。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展,細(xì)菌感染的檢測也向準(zhǔn)確、快速、便攜發(fā)展,分子生物學(xué)檢測、免疫學(xué)檢測以及生物芯片技術(shù)等的出現(xiàn),為細(xì)菌POCT的檢測增加了新的內(nèi)容。

        細(xì)菌感染的檢測方法主要包括以下幾種。

        1.涂片檢查 臨床標(biāo)本或分離培養(yǎng)物涂片檢查是病原學(xué)診斷最簡單易行的方法。可為進(jìn)一步做生化反應(yīng)、血清學(xué)鑒定等提供參考依據(jù)。通過對涂片的顯微鏡觀察,可以初步了解標(biāo)本中病原體的有無及大致的數(shù)量、種類、染色特征,如是球菌或桿菌;有無莢膜或芽孢;有無抗酸桿菌和腦膜炎奈瑟菌等均可作出初步診斷。

        (1)不染色標(biāo)本的檢查:不染色標(biāo)本的檢查通常用于觀察細(xì)菌的動力及運(yùn)動情況,在顯微鏡下根據(jù)細(xì)菌的折光率與周圍環(huán)境不同進(jìn)行觀察,根據(jù)其運(yùn)動的情況判斷細(xì)菌是否具有鞭毛,用以判斷某些特殊的細(xì)菌。例如在暗視野顯微鏡下觀察細(xì)菌的運(yùn)動,結(jié)合制動試驗(yàn)等診斷糞便中的霍亂弧菌。

        (2)染色標(biāo)本的檢查:常用的細(xì)菌染色法有革蘭染色法(Gram stain)和抗酸染色法。細(xì)菌經(jīng)染色后,可在普通光學(xué)顯微鏡下看到細(xì)菌的形態(tài)和某些特殊的結(jié)構(gòu),據(jù)此可對細(xì)菌進(jìn)行初步判斷和鑒定是革蘭陽性還是革蘭陰性,是球菌還是桿菌等。如在腦脊液直接涂片中發(fā)現(xiàn)革蘭陰性雙球菌,腎形凹面相對,且在吞噬細(xì)胞內(nèi)外,則可初步認(rèn)定為:“找到革蘭陰性雙球菌,形似腦膜炎奈瑟菌?!?/p>

        2.分離培養(yǎng)與鑒定 根據(jù)采集的臨床標(biāo)本的類型在選擇或非選擇性培養(yǎng)基上分離培養(yǎng),觀察細(xì)菌的菌落形態(tài)、生化反應(yīng)、毒素產(chǎn)生等,同時(shí)用免疫血清鑒定未知的細(xì)菌,確定致病菌的屬、種和血清型等。

        (1)分離培養(yǎng):分離培養(yǎng)是從臨床標(biāo)本中檢查鑒定細(xì)菌非常重要的第一步,只有從含有許多雜菌的標(biāo)本中分離出目的菌,才能對目的菌進(jìn)行鑒定。

        (2)鑒定:根據(jù)純培養(yǎng)細(xì)菌的染色形態(tài)、生長特性、生化反應(yīng)等結(jié)果,對分離培養(yǎng)的細(xì)菌進(jìn)行鑒定。

        3.分子生物學(xué)診斷 PCR技術(shù)直接擴(kuò)增病原體基因的保守序列,配合DNA探針雜交、DNA序列分析、基因芯片技術(shù)等,檢測臨床標(biāo)本中或分離培養(yǎng)物中細(xì)菌的核酸,可以對感染的細(xì)菌做出明確的診斷、分類、基因分型等。分子生物學(xué)診斷可以用于細(xì)菌的快速鑒定、分類鑒定、細(xì)菌毒素的檢測等。幾乎所有致病菌的基因都可直接從標(biāo)本中進(jìn)行擴(kuò)增后檢測而不受其他非致病菌的影響,特別是對分離培養(yǎng)較困難的細(xì)菌(如結(jié)核分枝桿菌)的鑒定更有實(shí)際意義。

        4.免疫分析 免疫分析的基本原理是檢測抗原抗體反應(yīng)形成的復(fù)合物。免疫分析的固相成分與固定的抗體相關(guān),捕獲抗原后與標(biāo)記抗體結(jié)合以做定性和定量分析。用于POCT免疫分析的檢測技術(shù)包括膠體金技術(shù)、乳膠標(biāo)記、熒光標(biāo)記技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)等。近年來免疫分析的方法廣泛運(yùn)用于細(xì)菌感染的檢測,操作方法簡單、快速、便于攜帶,由于試驗(yàn)不受檢測環(huán)境的影響,縮短了檢測時(shí)間,而為臨床細(xì)菌感染性疾病的早期及快速診斷治療爭取了有效的時(shí)間和空間。如用金標(biāo)法或乳膠凝聚法對結(jié)核分枝桿菌、金黃色葡萄球菌、幽門螺桿菌、白色念珠菌等進(jìn)行檢測。

        此外,C反應(yīng)蛋白(C reactive protein,CRP)測定與降鈣素原(procalcitonin,PCT)檢測可以快速反映人體細(xì)菌感染的狀況,能夠鑒別細(xì)菌與病毒感染,特別是在微生物學(xué)檢查較慢或不能檢查時(shí)更有意義。此類試驗(yàn)簡單,只需少量末梢血,數(shù)分鐘后即可出結(jié)果,對細(xì)菌感染性疾病的診斷治療具有十分重要的意義,在國內(nèi)外受到廣泛的關(guān)注。

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