支原體（mycoplasma）是1898年Nocard等發(fā)現(xiàn)的一種類似細(xì)菌但缺細(xì)胞壁的原核微生物，能在無生命的人工培養(yǎng)基上生長的病原微生物中的最小者，直徑0．2～0．3μm，能通過濾菌器，是介于細(xì)菌和病毒之間的一種“胸膜肺炎樣微生物”（pleuropneumonia-like organism，PPLO），1967年正式命名為支原體。對人致病的支原體主要有肺炎支原體（mycoplasma pneumoniae，Mp）、人型支原體（mycoplasma hominis，Mh）、生殖道支原體（mycoplasma genitalium，Mg）、解脲脲原體（ureaplasma urealyticum，Uu）。

Mp無細(xì)胞壁，不能維持固定的形態(tài)而呈球狀、桿狀、絲狀等多種多形態(tài)，只有三層結(jié)構(gòu)的細(xì)胞膜，細(xì)胞膜中膽固醇含量較多，約占36%，對保持細(xì)胞膜的完整性具有一定作用。革蘭染色陰性，一端有一種特殊的末端結(jié)構(gòu)（terminal structure），能使支原體黏附于呼吸道黏膜上皮細(xì)胞表面，與致病性有關(guān)。凡能作用于膽固醇的物質(zhì)（如兩性霉素B、皂素等）均可引起支原體膜的破壞而使支原體死亡。肺炎支原體對熱抵抗力差，通常55℃經(jīng)15min可滅活，37℃時只存活幾小時，苯酚、來蘇兒易將其殺死。能耐冰凍。

隨著致病原的變遷，肺炎支原體感染在嬰幼兒呼吸道感染中已占到30%左右，成為嬰幼兒致病的重要病原。肺炎支原體是引起非典型性肺炎的常見病原體?？梢鹦荷虾粑栏腥?、咽炎、氣管炎、支氣管炎、肺炎。肺炎支原體肺炎一年四季均可發(fā)生，秋冬季是肺炎支原體疾病的發(fā)病高峰。肺炎支原體在非流行期間約占小兒肺炎病原的10%～20%，流行年份則高達(dá)30%。肺炎支原體潛伏期2～3周。患兒主要表現(xiàn)為發(fā)熱，特征是高熱、咳嗽重，常呈陣發(fā)性痙咳，體溫大多在39℃左右。嬰幼兒表現(xiàn)出喘憋和呼吸困難。其中3%～10%可以發(fā)展成支原體肺炎。人類對Mp無先天免疫，感染后也不能產(chǎn)生完全的保護(hù)性免疫。

正確選擇抗生素是治療支原體肺炎成敗的關(guān)鍵。由于支原體躲在細(xì)胞內(nèi)，而青霉素類及頭孢菌素類藥物在細(xì)胞內(nèi)濃度很低，加之這兩種抗生素是通過破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁殺滅細(xì)菌的，而肺炎支原體沒有細(xì)胞壁，使得以上兩種抗生素“無能為力”。臨床應(yīng)用證實紅霉素在細(xì)胞內(nèi)濃度很高，可以殺滅支原體，但是紅霉素不良反應(yīng)較大，近年已用阿奇霉素代替，后者作用時間長，每天只需服用1次，不良反應(yīng)相對較少。一般需服用2～3周藥物，否則容易復(fù)發(fā)。

Mp的實驗室檢測包括①Mp快速培養(yǎng)：取咽拭子接種于肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基中24h可以出結(jié)果。②冷凝集試驗：滴度＞128有診斷價值，但陽性率僅50%左右。③抗原檢測：使用抗原捕獲酶免疫測定，敏感性較高。④補(bǔ)體結(jié)合試驗（CFT）：所用抗原為Mp的氯仿-甲醇糖脂抽提物，與人類、細(xì)菌及植物的某些抗原表位發(fā)生交叉反應(yīng)，因此敏感性和特異性不高。⑤間接血凝試驗（PHA）：不能區(qū)分抗體的類型，單份血清不能確定是既往感染還是現(xiàn)癥感染。⑥明膠顆粒凝集試驗（PA）：同PHA。⑦酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：可分別檢測IgM、IgG、IgA，可確定是既往感染還是現(xiàn)癥感染。⑧金標(biāo)快速檢測：只能進(jìn)行定性檢測，無法觀察血清轉(zhuǎn)化情況。其中抗原捕獲酶免疫測定、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和金標(biāo)快速檢測是常規(guī)實驗室最理想的快速檢測肺炎支原體的方法。

（一）肺炎支原體抗原檢測

【檢測原理】　從標(biāo)本中提取肺炎支原體抗原，并將其固定在檢測小杯的表面，然后加入鼠單克隆抗體（一抗），與肺炎支原體抗原結(jié)合，隨后加入標(biāo)記有過氧化物酶的羊抗鼠抗抗體（酶標(biāo)二抗），最后，通過與產(chǎn)色底物作用，得出有色反應(yīng)結(jié)果。

【適應(yīng)證】　呼吸道感染，尤其是肺炎的診斷與鑒別診斷。

【標(biāo)本采集】　各種體液標(biāo)本、拭子標(biāo)本、液體培養(yǎng)基標(biāo)本均適用。標(biāo)本的采集無需使用運輸培養(yǎng)基，因活的、死的肺炎支原體均可被檢測。采集并密封好的標(biāo)本可在2～8℃保存48h；或-20℃保存2周。若有必要，標(biāo)本可用黏液溶解劑進(jìn)行黏液的液化。

【參考范圍】　陰性。

【操作方法】

1．放置漏斗　在每只小杯上放置一漏斗，直到判斷試驗結(jié)果時方可移去。

2．抗原固定　向陰性質(zhì)控和待測小杯中各滴加4滴提取液，向陽性質(zhì)控小杯中滴加質(zhì)控品4滴，待滲干。

3．洗滌　每杯各加入5滴洗滌液并待其滲干，重復(fù)洗滌一次。

4．抗體結(jié)合　向陰性質(zhì)控小杯中滴加1滴陰性質(zhì)控品，待測小杯和陽性質(zhì)控小杯中各滴加1滴鼠抗肺炎支原體抗體，等待2min。

5．洗滌　每杯各加入5滴洗滌液并待其滲干，重復(fù)洗滌一次。

6．抗抗體結(jié)合　每個小杯各加1滴抗抗體，等待2min。

7．洗滌　每杯各加入5滴洗滌液并待其滲干，重復(fù)洗滌一次。

8．顯色　每個小杯各加入1滴顯色液，等待5min，移去漏斗，在5min內(nèi)觀察顏色反應(yīng)。

【結(jié)果判讀】

1．陰性質(zhì)控：白色或淡綠色。

2．陽性質(zhì)控：藍(lán)色或藍(lán)綠色。

3．檢測結(jié)果若顯色較陰性質(zhì)控強(qiáng)，則可判斷為陽性。若顯色較陰性質(zhì)控相同或更弱，則可判斷為陰性。

【臨床意義】　直接檢測標(biāo)本中肺炎支原體抗原，可用于臨床早期快速診斷。

【局限性】　由于活的和已死的肺炎支原體均可被檢測，無法確定是否現(xiàn)行感染。

（二）肺炎支原體（IgM、IgG）抗體

【檢測原理】　采用提純的肺炎支原體膜蛋白抗原預(yù)包被板ELISA原理，檢測人血清（血漿）中存在的肺炎支原體的IgM、IgG抗體，并配以酶標(biāo)記抗人IgM、IgG單克隆抗體作為標(biāo)記物。加入底物TMB顯色后終止反應(yīng)，在450nm波長測各孔OD值，OD值的大小與待檢抗體含量成正比。

【標(biāo)本采集】　血清、血漿。

【適應(yīng)證】　對新生兒、嬰幼兒及兒童和成人呼吸道近期感染的診斷與鑒別診斷具有重要的價值。

【操作方法】

1．試驗前試劑盒自冰箱中取出后應(yīng)置室溫（18～25℃）平衡30min以上。

2．打開試劑盒，用蒸餾水將20X濃縮洗液做1∶20稀釋配成洗滌工作液，然后充分混勻備用。

3．標(biāo)本處理。準(zhǔn)確吸取待檢血清5μl加入到500μl的樣品稀釋液中，充分混勻，室溫（18～25℃）作用至少10min。

4．分別取100μl已稀釋的樣本加入到板孔內(nèi)，同時設(shè)強(qiáng)陽性和弱陽性對照各一孔，陰性對照兩孔，取陰陽對照血清100μl直接加入。37℃孵育30min。

5．孵育后以洗液緩沖液洗滌板孔（使用自動洗板機(jī)或手工洗板）。重復(fù)洗滌過程4次，將微孔板翻轉(zhuǎn)過來在紙巾上拍打，使微孔中不再含有液體。

6．加入100μl酶結(jié)合物于相應(yīng)孔內(nèi)，37℃孵育30min。

7．孵育后，以洗液清洗板孔（洗滌見上）。

8．按順序分別加入底物A和B各50μl，37℃孵育（10±1）min。

9．終止反應(yīng)：每孔內(nèi)加入50μl終止液，輕微振蕩微孔板以混合溶液。

10．以空白孔調(diào)零，用酶標(biāo)儀測定各孔的OD450，如雙波長建議參考波長范圍為620～690nm（例如620nm）。

【結(jié)果判讀】

1．結(jié)果有效性　陽性對照孔OD值／陰性對照孔OD值，即P／N≥2．1，對照成立，否則應(yīng)重新實驗。

2．cut off值計算　cut off值＝陰性對照孔平均值×2．1。

3．結(jié)果判定　待測樣品的OD450值≥cut off值者，判為陽性，否則陰性。陰性對照孔OD小于0．05時按0．05計算。

【臨床意義】　Mp的IgM類抗體出現(xiàn)早，一般在感染后1周出現(xiàn)，3～4周達(dá)高峰，以后逐漸降低。由于肺炎支原體感染的潛伏期為2～3周，當(dāng)患者出現(xiàn)癥狀而就診時，IgM抗體已達(dá)到相當(dāng)高的水平，因此IgM抗體陽性可作為急性期感染的診斷指標(biāo)。如IgM抗體陰性，則不能否定肺炎支原體感染，需檢測IgG抗體。IgG較IgM出現(xiàn)晚，5周左右達(dá)峰值，在體內(nèi)持續(xù)時間長（4年左右），需動態(tài)觀察，如顯著升高提示近期感染，顯著降低說明處于感染后期。由此提示IgG與IgM同時測定，可提高診斷率，達(dá)到指導(dǎo)用藥、提高療效的目的。

【方法學(xué)優(yōu)點】　血清、血漿經(jīng)預(yù)吸收后非特異性因素（如RF因子和變性或聚合的人IgG）的影響被徹底消除，特異性高。