癌基因C-erbB-2是已知和乳腺癌預(yù)后有關(guān)的生物學(xué)因子。近來(lái)很多報(bào)道說(shuō)明C-erbB-2在乳腺癌中的過(guò)度表達(dá)與癌的分化、組織學(xué)類型、對(duì)內(nèi)分泌治療的反應(yīng)及病人的預(yù)后因素有關(guān)。

（一）FNAC涂片HE染色后的免疫細(xì)胞化學(xué)染色

陳婉嫻等于2002年對(duì)FNAC涂片HE染色，行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，行C-erbB-2基因檢測(cè)。

1.材料疑為惡性乳腺腫瘤患者，行細(xì)針吸取涂片，經(jīng)HE染色后做C-erbB-2檢查。

2.試劑來(lái)源C-erbB-2抗體，來(lái)自于Dako公司。

3.方法

（1）將乳腺腫物針吸細(xì)胞材料涂于APBS處理過(guò)的玻片上，及時(shí)固定于95%乙醇液中。

（2）HE染色，行細(xì)胞學(xué)診斷后，選取合適的涂片，浸入二甲苯中脫蓋玻片。

（3）各級(jí)乙醇清洗至水。

（4）高壓鍋?zhàn)隹乖迯?fù)處理，pH6.0枸櫞酸緩沖液2min或pH5.0EDT緩沖液中1.5min。

（5）冷卻后置于3%過(guò)氧化氫甲醇液中8min。

（6）用ABC法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，DAB顯色。

4.結(jié)果

在胞質(zhì)中可見(jiàn)C-erbB-2褐色陽(yáng)性物質(zhì)。

5.注意事項(xiàng):染色時(shí)應(yīng)有陽(yáng)性組織切片對(duì)照，注意全過(guò)程避免發(fā)生干燥。不經(jīng)過(guò)抗原修復(fù)的涂片效果不理想。若經(jīng)過(guò)抗原修復(fù)程序處理過(guò)的細(xì)胞學(xué)涂片原為陰性者可呈陽(yáng)性，且陽(yáng)性細(xì)胞增加。陽(yáng)性物質(zhì)清晰明確。

（二）細(xì)針穿刺乳腺癌腫物涂片行C-erbB-2蛋白檢測(cè)

1.材料和方法

（1）用10ml無(wú)菌注射器、7號(hào)針頭對(duì)乳腺腫物進(jìn)行穿刺，將吸出物推入盛有1640培養(yǎng)液的EP管內(nèi)。

（2）500r/min離心2～3次后，用1640培養(yǎng)液洗滌2～3次。

（3）除去紅細(xì)胞及壞死組織，余0.2ml細(xì)胞懸液用離心涂片機(jī)涂片。

（4）涂片自然干燥后，用丙酮固定。

2.免疫組織化學(xué)染色注意事項(xiàng) 免疫細(xì)胞化學(xué)染色采用LSAB法。

（1）抗C-erbB-2蛋白為多克隆抗體（DAKO公司產(chǎn)品，1∶100稀釋）。

（2）每一例均用組織切片LSAB免疫組織化學(xué)染色作為對(duì)照。

（3）只記錄單個(gè)或單層成團(tuán)的瘤細(xì)胞（炎性細(xì)胞、壞死細(xì)胞和成堆的瘤細(xì)胞不記錄）。

（4）細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)深于背景的棕黃色顆粒即為陽(yáng)性細(xì)胞。

（5）若陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>20%者即為陽(yáng)性。