1.離體實(shí)驗(yàn)

(1)刷狀緣囊泡和基底膜囊泡刷狀緣囊泡(BBMV)和基底膜囊泡(BLMV)分別是早期藥物在小腸吸收和排出的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，是研究氨基酸、維生素H、單羧酸、膽堿、二肽和糖類(lèi)等特定結(jié)構(gòu)分子以及一些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和藥物主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的較好模型。

動(dòng)物組織來(lái)源主要為兔、豬和大鼠，采用細(xì)胞破損、梯度離心、免疫吸附劑色譜和鈣鎂離子選擇性沉淀等方法制備BBMV和BLMV。藥物攝取實(shí)驗(yàn)一般采用快速過(guò)濾法測(cè)定，即將一定體積的BBMV混懸液用孵育介質(zhì)稀釋后加入一定量藥物，特定時(shí)間后終止孵育，濾過(guò)，測(cè)定濾液中的藥物即可推算出BBMV吸收藥物的量。

(2)Ussing Chamber系統(tǒng)1951年，Ussing和Zerahn設(shè)計(jì)使用擴(kuò)散池技術(shù)來(lái)研究青蛙皮膚鈉的轉(zhuǎn)運(yùn)，該擴(kuò)散池模型被命名為Ussing Chamber系統(tǒng)。該系統(tǒng)廣泛用于研究藥物滲透性，也可用于研究藥物代謝，是預(yù)測(cè)藥物在人體腸道吸收的較好模型。

實(shí)驗(yàn)方法:將大鼠、豬或人的黏膜組織固定在兩室之間，一個(gè)室為黏膜側(cè)(頂側(cè))，另一個(gè)為基底側(cè)(漿膜側(cè))，兩室中為飽和混合氧的KRB緩沖液，藥物加在黏膜側(cè)或漿膜側(cè)，定時(shí)測(cè)定藥物在另外一室的轉(zhuǎn)運(yùn)量。

該系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)是雙向轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝研究都能夠在特定的小腸段進(jìn)行，藥物需要量少，且可加在黏膜側(cè)或漿膜側(cè)，組織可以選取多種種屬。缺點(diǎn)是完全分離漿膜側(cè)的肌肉層很困難，肌肉層的存在以及漿膜側(cè)沒(méi)有血流，會(huì)導(dǎo)致低估該系統(tǒng)計(jì)算的藥物吸收速度。此外，由于需要通入混合氧氣，組織表面產(chǎn)生了循環(huán)的液體，削弱了黏膜表面不流動(dòng)水層的影響。

(3)翻轉(zhuǎn)腸囊法翻轉(zhuǎn)腸囊法已普遍使用，除了可以考察藥物的腸吸收外，也可以考察藥物是否受到P-gp等外排轉(zhuǎn)運(yùn)器的作用。成本低，可以測(cè)定不同腸段的差異。缺點(diǎn)在于，藥物必須通過(guò)所有小腸壁層;腸囊內(nèi)液體停滯不動(dòng)，與生理?xiàng)l件不同;制備翻轉(zhuǎn)腸囊的時(shí)候容易損傷腸黏膜，可采用乳酸脫氫酶法進(jìn)行檢測(cè)。

有兩種實(shí)驗(yàn)方案，一種是將腸囊翻轉(zhuǎn)后兩端都封閉，另一種是翻轉(zhuǎn)腸囊后一端封閉，另一端開(kāi)口取樣。制備翻轉(zhuǎn)腸囊的整個(gè)過(guò)程一般不能超過(guò)8min，并且整個(gè)過(guò)程都應(yīng)保持在通氧的緩沖液中進(jìn)行，腸囊長(zhǎng)度可在1～10cm之間。

2.在體腸灌流法

腸灌流的缺點(diǎn)包括:麻醉狀態(tài)的動(dòng)物可能在膜滲透代謝方面出現(xiàn)差異，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或其他內(nèi)源性物質(zhì)的缺少可能影響器官的功能等。

(1)小腸單向灌流法這種灌流方法主要對(duì)麻醉狀態(tài)下的動(dòng)物小腸套管后灌流藥物溶液，血流和其他組織都保持完好;裝置簡(jiǎn)便，動(dòng)物手術(shù)操作簡(jiǎn)單。該法的不足是腸道吸收的藥物量根據(jù)藥物從腸道的減少量確定，而不是用血液中藥物的出現(xiàn)量表示吸收量。

實(shí)驗(yàn)方法:大鼠麻醉，沿腹中線打開(kāi)腹腔，分離出需要研究的腸段，取約10cm于兩端切口，體溫生理鹽水清洗干凈內(nèi)容物，于切口處插管、扎緊，開(kāi)啟恒流泵灌流，每隔一定時(shí)間收集流出液直至結(jié)束。實(shí)驗(yàn)后處死大鼠，剪下灌流腸段，用細(xì)線測(cè)量其長(zhǎng)度和內(nèi)徑。

常用重量法和酚紅法計(jì)算、校正流出液中藥物含量，排除腸道對(duì)水分的吸收所導(dǎo)致灌流液體積隨時(shí)間的變化。有文獻(xiàn)采用了一種相對(duì)簡(jiǎn)單的重量法來(lái)標(biāo)示灌流液體積，避免“標(biāo)示物”帶來(lái)的問(wèn)題，即腸灌流達(dá)到穩(wěn)態(tài)后，每隔一段時(shí)間用已知重量的小瓶收集腸灌流液，同時(shí)迅速更換下一個(gè)供試小瓶和收集液小瓶，稱(chēng)量供試液小瓶和收集液小瓶的重量直至結(jié)束。其誤差來(lái)源于收集液密度的變化。

大鼠小腸的灌流速度一般為0.2mL/min，這是基于人的小腸灌流速度為2～3mL/min，而人的小腸直徑是大鼠的10倍左右。單向灌流低流速更能模擬腸蠕動(dòng)生理?xiàng)l件。空腸是哺乳動(dòng)物吸收大多數(shù)藥物的主要區(qū)域，面積較大，具有最多的主動(dòng)吸收載體，再加上大鼠腸道和人腸道有諸多相似點(diǎn)，所以大多臨床前藥物透過(guò)性研究應(yīng)用大鼠空腸。

(2)小腸循環(huán)灌流技術(shù)主要用于難吸收藥物的腸透過(guò)性研究。循環(huán)灌流和單向灌流的差別是藥物溶液重復(fù)地從小腸段“灌進(jìn)—流出—再灌進(jìn)—再流出”直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

在單向灌流實(shí)驗(yàn)中，因?yàn)樗幬锶芤和ㄟ^(guò)腸道的實(shí)驗(yàn)時(shí)間較短，“標(biāo)示物”的吸收往往可以忽略;而在循環(huán)灌流中，由于藥物溶液反復(fù)通過(guò)腸腔，“標(biāo)示物”的吸收就不能忽略。

(3)腸道血管灌流技術(shù)上述小腸灌流實(shí)驗(yàn)中滲透系數(shù)的計(jì)算以藥物在腸道中的量為基礎(chǔ)，不考慮藥物在漿膜側(cè)的出現(xiàn)量，通過(guò)腸道血管灌流技術(shù)可彌補(bǔ)這一不足。該方法可以同時(shí)進(jìn)行腸道灌流實(shí)驗(yàn)，也可單獨(dú)進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)述為:大鼠頸動(dòng)脈插管供給血液，用于補(bǔ)償后續(xù)腸系膜靜脈插管灌流中的大鼠血液損失;分離回腸部分與灌流泵和灌流的藥液連接好，開(kāi)始藥物灌流，收集腸段灌流樣品;腸系膜靜脈插管，啟動(dòng)供給血液的蠕動(dòng)泵，供給血液，調(diào)節(jié)速度使與腸系膜血液流出的速度相等，在規(guī)定時(shí)間點(diǎn)從腸系膜靜脈插管收集血樣。

(4)原位腸肝灌流技術(shù)該技術(shù)可用于直接測(cè)定小腸吸收與肝臟的首過(guò)效應(yīng)，闡明藥物的腸肝循環(huán)與代謝。

大鼠麻醉后腹部切口，向兩側(cè)延伸至橫膈水平呈“V”形，先結(jié)扎腹腔動(dòng)脈與肝動(dòng)脈，用含有肝素生理鹽水的導(dǎo)管做幽門(mén)靜脈插管，用于取血樣。分離腸系膜上動(dòng)脈、右腎動(dòng)脈和腹主動(dòng)脈，在右腎動(dòng)脈分支的腹主動(dòng)脈處置一個(gè)血管夾，結(jié)扎右腎動(dòng)脈，在二者之間做小切口插管，管子經(jīng)右腎動(dòng)脈分支處入腹主動(dòng)脈，再進(jìn)入腸系膜上動(dòng)脈進(jìn)入右腎動(dòng)脈，插管固定后開(kāi)通灌流。打開(kāi)胸腔，在右心房上做一切口，插入塑料管，其尖端順下腔靜脈進(jìn)入肝靜脈，固定插管，收集經(jīng)肝臟的灌流液。

(5)小腸近端灌流實(shí)驗(yàn)(Loc-I-Gut法)該法測(cè)定的是藥物經(jīng)人體小腸的膜滲透性，與人體內(nèi)結(jié)果最為接近，得到的滲透系數(shù)也最可靠，吸收實(shí)驗(yàn)幾乎不受腸液的干擾。用于考察藥物吸收、系統(tǒng)前代謝、藥物溶出、體內(nèi)外相關(guān)、藥物間相互作用、個(gè)體間差異等。

使用一個(gè)滅菌聚氯乙烯制得的多重通道的管道，遠(yuǎn)端有兩個(gè)伸長(zhǎng)的球，兩個(gè)寬管在管道的中心，用來(lái)輸注和回收含藥灌流液，余下的兩個(gè)外周窄管用于矯正灌流腸道的水分變化，另外一個(gè)胃管用于引流胃液。受試對(duì)象在熒光透視技術(shù)引導(dǎo)下降管道從口腔插入，并固定位于空腸近端，以一定流速開(kāi)始灌流實(shí)驗(yàn)。