任務(wù)4　染色液與指示劑

1．染色液

1）簡單染色液

石炭酸復(fù)紅染液：A液為3%的堿性復(fù)紅乙醇溶液；B液為5%石炭酸溶液。

將0．3g堿性復(fù)紅在研缽中研磨后，逐漸加入10mL　95%乙醇，繼續(xù)研磨使其溶解，配制成A液。

將5．0g石炭酸溶解于95mL蒸餾水中，配制成B液。

取A液10mL、B液90mL，混合即可。一般可將此溶液稀釋5～10倍使用，但稀釋液易變質(zhì)失效，一次不宜多配。

2）革蘭氏染色液

（1）草酸銨結(jié)晶紫染液：A液為1%的結(jié)晶紫（crystal violet）乙醇溶液（結(jié)晶紫2．0g，95%乙醇20mL）；B液為1%的草酸銨（ammonium oxalate）溶液（草酸銨8．0g，蒸餾水80mL）。

取A液20mL、B液80mL混合，靜置48h后使用。

（2）盧戈氏（Lugol’s）碘液：碘片1．0g，碘化鉀2．0g，蒸餾水300mL。

先將碘化鉀溶解在少量水中，再將碘片溶解在碘化鉀溶液中，待碘全部溶解后，加水即可。

（3）95%乙醇溶液。

（4）番紅（沙黃）染液：番紅2．5g，95%乙醇100mL。

取上述配好的番紅乙醇溶液10mL與90mL蒸餾水混勻即可。

3）芽孢染色液

（1）5%孔雀綠染液：孔雀綠5g，蒸餾水100mL。

（2）0．5%番紅染液：番紅0．5g，蒸餾水100mL。

4）莢膜染色液

（1）5%黑色素水溶液：黑色素5g，蒸餾水100mL，40%甲醛（福爾馬林）0．5mL。

將黑色素在蒸餾水中煮沸5min，配成5%的溶液，然后加入福爾馬林作防腐劑。

（2）番紅（沙黃）染液：與革蘭氏染色液中番紅染液相同。

5）鞭毛染色液（銀染色法）

A液：單寧酸5．0g，F(xiàn)eCl₃1．5g，15%甲醛（福爾馬林）2．0mL，1%NaOH溶液1．0 mL，蒸餾水100mL。

待A液FeCl₃溶解后，加入1%NaOH溶液1mL和15%甲醛溶液2mL。配好后需當(dāng)日使用，次日效果差，第三日則不可使用。

B液：2%AgNO₃溶液（AgNO₃2g，蒸餾水100mL）。

待AgNO₃溶解后，取出10mL備用。向其余的90mL　AgNO₃中滴加濃NH4OH，形成濃厚的懸浮液。繼續(xù)滴加NH4OH，直到新形成的沉淀又重新剛剛?cè)芙鉃橹?。再?0 mL備用的AgNO₃溶液慢慢滴入，此時(shí)出現(xiàn)薄霧，輕輕搖動(dòng)后，薄霧狀沉淀消失，再滴入AgNO₃溶液，直到搖動(dòng)后仍呈現(xiàn)輕微而穩(wěn)定的薄霧狀沉淀為止。若所呈現(xiàn)的霧不重，此染液可使用一周；若霧重，則銀鹽易沉淀出，不宜使用。

2．指示劑

1）簡單指示劑

（1）麝香草酚藍(lán)或百里酚藍(lán)。

變色范圍：pH　1．2～2．8，顏色由紅→黃。常使用濃度為0．04%的乙醇溶液。

配制方法：稱取0．1g指示劑溶于100mL　20%乙醇中，或稱取0．1g指示劑，加入21．5mL　0．01mol／L　NaOH溶液，再加入蒸餾水至250mL。

（2）溴麝香草酚藍(lán)或溴百里酚藍(lán)。

變色范圍：pH　6．0～7．6，顏色由黃→藍(lán)。常用濃度為0．04%。

配制方法：稱取0．1g指示劑，加入16mL　0．01mol／L　NaOH溶液，然后加入蒸餾水定容至250mL。

（3）溴酚藍(lán)。

變色范圍：pH　3．0～4．6，顏色由黃→紫。常用濃度為0．04%。

配制方法：稱取0．1g指示劑，加入14．9mL　0．01mol／L　NaOH溶液，再加入蒸餾水至250mL；或稱取0．1g指示劑溶于100mL　20%乙醇溶液中，再加入蒸餾水定容至250mL。

（4）溴甲酚綠。

變色范圍：pH　3．8～5．4，顏色由黃→藍(lán)。常用濃度為0．04%。

配制方法：稱取0．1g指示劑，加入14．3mL　0．01mol／L　NaOH溶液，再加入蒸餾水至250mL。

（5）溴甲酚紫。

變色范圍：pH　5．2～6．8，顏色由黃→紫。常用濃度為0．04%。

配制方法：稱取0．1g指示劑，加入18．5mL　0．01mol／L　NaOH溶液，再加入蒸餾水至250mL。

（6）甲基紅。

變色范圍：pH　4．2～6．3，顏色由紅→黃。常用濃度為0．04%。

配制方法：稱取0．1g指示劑，加入150mL　95%乙醇溶液進(jìn)行溶解，再加入蒸餾水至250mL。

（7）甲基橙。

變色范圍：pH　3．1～4．4，顏色由紅→橙黃。常用濃度為0．04%。

配制方法：稱取0．1g指示劑，加入3mL　0．01mol／L　NaOH溶液，再加入蒸餾水至250mL。

（8）石蕊。

變色范圍：pH　5．0～8．0，顏色由紅→藍(lán)。常用濃度為0．5%～1．0%。

配制方法：稱取0．5～1．0g指示劑溶于100mL蒸餾水中即可。

（9）酚紅。

變色范圍：pH　6．8～8．4，顏色由黃→紅。常用濃度為0．02%。

配制方法：稱取0．1g指示劑，加入28．2mL　0．01mol／L　NaOH溶液，再加入蒸餾水至500mL。

（10）酚酞。

變色范圍：pH　8．2～10．0，顏色由無色→紅色。常用濃度為0．1%。

配制方法：稱取0．1g指示劑，溶于100mL　60%乙醇溶液中。

2）混合指示劑

混合指示劑分為兩種：一是由兩種解離常數(shù)K值相近的指示劑混合而成；一種是由指示劑與惰性染料混合而成，利用其顏色互補(bǔ)，使終點(diǎn)變色更加敏銳。

注意：凡標(biāo)有＊記號(hào)的，是必須儲(chǔ)存于棕色試劑瓶中的指示劑。

（1）甲基黃－亞甲藍(lán)。

變色點(diǎn)：pH　3．25，顏色由藍(lán)紫→綠。

配制方法：1體積1g／L甲基黃的乙醇溶液與1體積1g／L亞甲藍(lán)的乙醇溶液混合，搖勻。

（2）溴甲酚綠－甲基紅。

變色點(diǎn)：pH　5．1，顏色由酒紅→綠。

配制方法：3體積1g／L溴甲酚綠的乙醇溶液與1體積2g／L甲基紅的乙醇溶液混合，搖勻。

（3）甲基紅－亞甲藍(lán)＊。

變色點(diǎn)：pH　5．4，顏色由紅紫→綠。

配制方法：1體積2g／L甲基紅的乙醇溶液與1體積1g／L亞甲藍(lán)的乙醇溶液混合，搖勻。

（4）甲基橙－靛藍(lán)胭脂紅。

變色點(diǎn)：pH　4．1，顏色由紫→綠。

配制方法：1體積1g／L甲基橙水溶液與1體積2．5g／L靛藍(lán)胭脂紅水溶液混合，搖勻。

（5）中性紅－亞甲藍(lán)＊。

變色點(diǎn)：pH　7．0，顏色由紫藍(lán)→綠。

配制方法：1體積1g／L中性紅的乙醇溶液與1體積的1g／L亞甲藍(lán)的乙醇溶液混合，搖勻。

（6）中性紅－溴百里酚藍(lán)。

變色點(diǎn)：pH　7．2，顏色由玫瑰紅→綠。

配制方法：1體積1g／L中性紅的乙醇溶液與1體積1g／L溴百里酚藍(lán)的乙醇溶液混合，搖勻。

（7）花青（染料）_－酚紅。

變色點(diǎn)：pH　7．2，顏色由玫瑰紅→綠。

配制方法：2體積1g／L花青（氮萘藍(lán)）的50%乙醇溶液與1體積1g／L酚紅的50%乙醇溶液混合，搖勻。

（8）酚酞－甲基綠＊。

變色點(diǎn)：pH　8．9，顏色由綠→紫。

配制方法：1體積1g／L酚酞的乙醇溶液與2體積1g／L甲基綠的乙醇溶液混合，搖勻。

（9）百里酚藍(lán)－酚酞。

變色點(diǎn)：pH　9．0，顏色由黃→紫。

配制方法：1體積1g／L百里酚藍(lán)的50%乙醇溶液與3體積1g／L酚酞的50%乙醇溶液混合，搖勻。