黃腐酸鈉對小鼠胃腸運動及胃潰瘍的實驗研究

李月梅1 李寶才1 李  鵬1 劉建珍1 崔佳麗1 梅展青2

（1 昆明理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 昆明 650224

2 香港滿好集團云南滿好肥料有限公司 昆明 650106）

摘  要：研究黃腐酸鈉對小鼠胃腸運動的影響及對胃潰瘍的保護作用。以黑色炭末為指示劑，通過測定正常小鼠、復(fù)方地芬諾酯所致的小鼠小腸推進抑制、生大黃致小鼠脾虛腹瀉模型的炭末推進百分率，觀察黃腐酸鈉(100 mg/kg，200 mg/kg，ig)對小鼠腸運動的影響；采用無水乙醇灌胃造成小鼠急性胃潰瘍，觀察黃腐酸鈉預(yù)防給藥(100 mg/kg，200 mg/kg，ig)對胃黏膜損傷的保護作用，計算潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率。黃腐酸鈉灌胃對正常小鼠、生大黃致小鼠腹瀉模型均有一定抑制胃腸運動作用，對復(fù)方地芬諾酯所致小鼠胃腸運動減弱有明顯的協(xié)同作用；對無水乙醇引起的小鼠胃黏膜損傷有保護作用，高劑量黃腐酸鈉與陽性對照藥物雷尼替丁的潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率無顯著性差異。黃腐酸鈉具有止瀉、抗胃潰瘍、保護胃黏膜損傷的作用。

關(guān)鍵詞：黃腐酸鈉 胃腸運動 脾虛 胃潰瘍

Effects of Na - FA on Gastrointestinal Movement and Gastriculcer in Mice

Li Yuemei1, Li Baocai1, Li Peng1, Liu Janzhen1, Cui Jiali1, Mei Zhanqing2

(1 Faculty of Life Science and Technology, Kunming University of Science and Technology, Kunming, 650224

2 Hongkong Manhao Group Yunnan Manhao Fertilizer Co. Ltd., Kunming, 650106)

Abstract: To study the effects of FA-Na on gastrointestinal movement and the protective effects on gastric ulcer models. Using charcoal powder as an indicator, oberserve the effects of FA-Na(100 mg/kg, 200 mg/kg, ig) on bowel movement of mice by determining the propulsive percentage of charcoal powder in normal mice, inhibition of small intestinal propulsion model induced by compound diphenoxylate and spleen asthenia and diarrhea model caused by Radix et Rhizoma Rhei; The acute gastric ulcer model was induced by intragastric alcohol given orally, observe the protective effect of FA-Na(100 mg/kg, 200 mg/kg, ig) given ahead on gastric injury, reckon the ulcer index and the inhibition ratio of ulcer. FA-Na(intragastric administration) had some inhibit effect on normal mice and diarrhea model caused by Radix et Rhizoma Rhei, remarkedly synergetic effect on gastrointestinal asynersis induced by Compound Diphenoxylate, and protective effect on mice gastric mucosal injury cause by dehydrated alcohol. Compared with the positive control durg Ranitidine(50mg/kg), the ulcer index and ulcer inhibition ratio large doses of FA-Na had no significant difference. FANa has the effects of antidiarrheal and anti-gastric ulcer.

Key words: FA-Na; gastrointestinal movement; spleen asthenia; gastric ulcer

腐植酸(humic acid，簡稱HA)是一種復(fù)雜的天然大分子有機弱酸，是由自然界植物殘體經(jīng)過腐解后形成的產(chǎn)物，屬于一種芳香族復(fù)合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)迄今尚未完全清楚，經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)分子內(nèi)含有羧基、羰基、醌基、酚基等多種官能團?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)腐植酸及其鹽類具有抗?jié)儭⑾?、去風(fēng)濕、抗病毒、增強三氧化二砷抗宮頸癌的藥效等作用[1～5]。不同產(chǎn)地的FA因煤化程度和提取方法不同而藥效各異。黃腐酸(fulvic acid，簡稱FA)是HA中分子量最小、溶解度最高、生物活性最強、吸收效果最佳的部分，故藥用中以FA及其鹽類為主。本實驗采用從年青褐煤中提取的黃腐酸鈉，研究其對腹瀉及胃潰瘍的作用。

1  材料

1.1 藥物經(jīng)及試劑

黃腐酸鈉，本實驗室提供。生大黃(Rheum officinale Raill)，購于云南綠生藥業(yè)有限公司,將原生藥粉碎后過200目篩,臨用前制成10%的混懸液。復(fù)方地芬諾酯，常州康普藥業(yè)有限公司批號0906030),2.5毫克/片,制成混懸液,濃度為0.1 g/ L。人參健脾丸，北京同仁堂制藥有限公司生產(chǎn),批號20090301。雷尼替丁。羧甲基纖維素鈉800～1200，國藥集團化學(xué)試劑有限公司?；钚蕴浚旖蚴谢瘜W(xué)試劑六廠三分廠。

1.2 動物

清潔型昆明種小白鼠，體重(20±2) g，購自昆明醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。

2  方法

2.1 FA-Na對正常小鼠及復(fù)方地芬諾酯所致的小鼠小腸推進抑制的影響

參考文獻[6]方法加以改進。昆明種小鼠60只隨機分為空白對照組、便秘模型組、便秘給藥組(低、高劑量給藥組)、正常給藥組(低、高劑量給藥組)6組,每組10只。除空白組和便秘模型組灌胃(ig)蒸餾水外,其余各組ig相應(yīng)藥液。給藥量均為0.01 mL/g,每天1次,連續(xù)7 d。各組動物禁食不禁水12 h后,各給藥組先灌服FA-Na(100、200 mg/kg),空白對照組及模型組灌服同體積生理鹽水。灌胃給藥40 min后,便秘模型組及便秘給藥組均以復(fù)方地芬諾酯0.01 mL/g灌胃,空白對照組及正常給藥組予同體積生理鹽水。藥后20 min,每鼠ig 5%的炭末混懸液(用1%的羧甲基纖維素鈉配制)0.01 mL/g。20 min后, 脫頸椎處死小鼠，打開腹腔仔細(xì)分離腸系膜,剪取上端自幽門,下端至回盲部的腸管,輕輕將腸管不加牽引平鋪于玻璃板上,用米尺測量小腸總長度和墨汁推進的距離。按下列公式計算炭末推進率。

炭末推進率(%)=炭末在腸內(nèi)推動距離/小腸總長度×100%

2.2 FA-Na對脾虛小鼠體重及胃腸運動的影響(生大黃粉致小鼠脾虛模型)

參考文獻[7]方法，加以改進。雄性小鼠50只，體重18～22 g，隨機分為5組，每組10只。除正常對照組外，其余各組均ig給予10%的生大黃粉混懸液，每次0.015 mL/g，每日2次，連續(xù)給藥15 d，造成小鼠脾虛模型。自給生大黃粉混懸液的第3天起，人參健脾丸組和FA-Na組開始ig相應(yīng)藥物，每日1次，連續(xù)13 d。模型及正常對照組給等體積的蒸餾水。在給藥過程中，隨時觀察小鼠的糞便及體征變化，每日給藥前稱量小鼠的體重。小鼠于實驗前12 h禁食，第16天再給藥1次，藥后1.5 h給小鼠ig 5%的炭末混懸液0.01 mL/g體重，20 min后，脫頸椎處死小鼠，立即剖腹取出小腸全長，記錄炭末前沿至幽門的距離，計算占小腸全長的百分比。

2.3  FA-Na對無水乙醇致胃潰瘍的影響

小鼠40只,隨機分為4組,模型組，F(xiàn)A-Na低、高劑量組和雷尼替丁陽性對照組,每組10只。FA-Na組灌服FA-Na(100、200 mg/kg)，連續(xù)6 d。雷尼替丁組ig給藥50 mg/kg,連續(xù)6 d。正常對照組和模型組則灌服蒸餾水0.01 mL/g,連續(xù)6 d。末次給藥后次日，小鼠自由飲水,除正常對照組外其余3組小鼠禁食24 h后灌胃無水乙醇0.01 mL/g造成急性胃黏膜損傷，1 h后脫頸椎處死小鼠,打開腹腔結(jié)扎賁門、幽門，1%甲醛溶液1 mL ig,結(jié)扎賁門部,游離胃,并置1%甲醛溶液10 min后,沿胃大彎剪開，0.85%氯化鈉溶液沖去內(nèi)容物,展平，放大鏡下觀察胃粘膜，按Guth標(biāo)準(zhǔn)[8]計算潰瘍指數(shù)和抑制率。

潰瘍抑制率(%)=(損傷模型組潰瘍指數(shù)-給藥組潰瘍指數(shù))/損傷模型組潰瘍指數(shù)×100。

2.4 統(tǒng)計學(xué)處理方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件處理,數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,進行組間t檢驗分析,判斷其差異顯著性，P<0.05表示有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異。

3  結(jié)果

3.1 FA-Na對正常小鼠及復(fù)方地芬諾酯所致的小鼠小腸推進抑制的影響

試驗表明FA-Na具有抑制小鼠小腸蠕動的作用,但與空白組比較無顯著性差異。見表1。

復(fù)方地芬諾酯與正常對照組比較,可明顯抑制小鼠的小腸推進運動(P<0.01)；FA-Na對復(fù)方地芬諾酯所致的小鼠小腸推進減弱有促進作用(P<0.05)。FA-Na對復(fù)方地芬諾酯所致小鼠胃腸運動減弱有明顯的協(xié)同作用，結(jié)果見表2。

3.2 FA-Na對脾虛小鼠體征、體重及小腸碳末推進運動的影響

10%的生大黃粉混懸液連續(xù)給藥16 d,模型組及各給藥組小鼠于造模當(dāng)天4 h后即開始軟便,部分小鼠泄瀉,第4天則出現(xiàn)食欲減退、活動減少、行動遲緩、豎毛拱背、毛色失澤等脾虛癥狀。正常對照組則無上述現(xiàn)象。于造模后第3天各給藥組開始ig FA-Na,連續(xù)給藥14 d。各給藥組小鼠的毛色及精神狀態(tài)均明顯好于模型組。

10%的生大黃粉混懸液連續(xù)給藥1 6d,與正常對照組比較,可使小鼠的體重顯著下降。FA-Na組與模型對照組比較無明顯差異(P>0.05)。結(jié)果顯示, FA-Na對生大黃粉混懸液所致的脾虛小鼠體重下降無明顯的提升作用，見表3。

注：★P<0.01 vs正常對照組；▲P<0.05 vs復(fù)方地諾酚酯。

注：★P<0.01 vs正常對照組。

10%的生大黃粉混懸液連續(xù)給藥16 d,與正常對照組比較,可使小鼠的胃腸推進運動明顯加快(P<0.05)；FA-Na連續(xù)口服給藥14 d,均可使脾虛模型小鼠的胃腸運動顯著減慢(P<0.05， P<0.01)。結(jié)果顯示，F(xiàn)A-Na對生大黃粉混懸液所致的脾虛小鼠胃腸運動加快有明顯的拮抗作用,使胃腸運動機能趨于正常，見表4。

注：▲P<0.05 vs正常對照組；★P<0.05 vs模型組；★★P<0.01 vs模型組。

3.3 FA-Na對無水乙醇致胃潰瘍的影響

乙醇損傷模型組可見胃黏膜有不同程度的損傷，黏膜明顯出血、大面積糜爛黏膜表面附著血痂。FA-Na高、低量組和雷尼替丁組僅有輕度胃黏膜充血，見明顯糜爛。

與正常對照組比較，乙醇損傷組小鼠的胃黏膜潰瘍指數(shù)顯著增加(P<0.01)；與乙醇損傷組比較，F(xiàn)A-Na高、低劑量組和雷尼替丁對照組的潰瘍指數(shù)均顯著降低(P<0.01)，并且FA-Na高劑量組對乙醇損傷胃黏膜的抑制作用較雷尼替丁相似(P>0.05)，結(jié)果見表5。

表5 FA-Na對無水乙醇致胃潰瘍的影響
Tab.5 Effects of FA-Na on dehydrated alcohol impaired gastric ulcer in mice

注：▲P<0.01 vs模型組。

4  結(jié)論與討論

本實驗重點研究了黃腐酸鈉對正常小鼠、復(fù)方地芬諾酯所致的小鼠小腸推進抑制、生大黃致小鼠脾虛腹瀉模型及無水乙醇致胃潰瘍的影響。實驗結(jié)果表明，黃腐酸鈉能夠抑制正常小鼠的胃腸運動；顯著促進復(fù)方地芬諾酯所致的小鼠胃腸運動減弱；明顯改善脾虛小鼠的體征；抑制脾虛小鼠的胃腸運動、對抗泄瀉；對乙醇致潰瘍有明顯的保護作用,能抑制潰瘍的形成。

FA-Na對復(fù)方地芬諾酯所致小鼠胃腸運動減弱有明顯地協(xié)同作用。于吉人等[9]發(fā)現(xiàn)酚妥拉明可以減弱泥炭腐植酸對胃腸運動的抑制作用。黃腐酸鈉通過作用于α受體與直接作用于胃腸道平滑肌而起作用。無水乙醇所致胃潰瘍是由于酒精直接損傷胃粘膜，從而引起胃壁血液循環(huán)障礙、組織壞死脫落導(dǎo)致潰瘍形成，另外，乙醇可以刺激胃劇烈蠕動，引起機械性胃損傷[10]。黃腐酸鈉抗?jié)冏饔脵C制，可能與降低胃液酸度和抗菌作用有關(guān)。

參考文獻

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[ 2 ]祝亞勤，李燕敏，唐麗等.草炭腐植酸抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究[J].腐植酸，2000，(2): 25～27

[ 3 ]王洪杰，祝亞勤，李燕敏，等.草炭黃腐(下轉(zhuǎn)251頁)(上接204頁) 植酸鈉對風(fēng)濕性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床療效觀察[J].中醫(yī)藥學(xué)報，1996，(3) :23

[ 4 ]Kl?cking R & Spr??ig M . Antiviral properties of humic acids[J]. Experientia,1972, 28:607

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[ 7 ]中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南[S].1994

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[ 9 ]于吉人，顧猛進，王德民，等.泥炭腐植酸對小鼠胃腸推進運動的影響[J].北京醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1983，15(1增刊):1～3

[ 10 ]陳志東.消化性胃潰瘍模型在研究新藥中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006，15 (15):2137～2138