五、菌種的培養(yǎng)與生產(chǎn)

通過組織分離法、孢子分離法和寄主分離得到的純菌絲體，即為該種羊肚菌的母種。母種獲得以后，為了滿足菌種生產(chǎn)的需要，應(yīng)選出性狀優(yōu)良、純度高的母種進(jìn)一步擴(kuò)大為原種（也叫二級菌種），其制作目的為了擴(kuò)大種量，滿足生產(chǎn)上的需要，檢驗(yàn)已制作母種的生命力、純度；讓母種菌絲適應(yīng)各種秸稈類物質(zhì)。

（一）接 種

1.母種接種方法

通過組織分離法、孢子分離法和寄主分離得到的純菌絲體，即為該種羊肚菌的母種（也稱一級種），其擴(kuò)大培養(yǎng)也稱繼代培養(yǎng)、轉(zhuǎn)接、轉(zhuǎn)管等。將滅菌好的母種培養(yǎng)基試管移入接種箱或潔凈工作臺，將母種試管用酒精棉擦拭外壁，拿入接種箱，在火焰上打開棉塞，右手拿接種鏟或大鑷子，并在火焰上燒紅待冷，再從母種管內(nèi)挑出豆粒大小一塊菌絲（附帶有培養(yǎng)基），打開母種培養(yǎng)基棉塞，將母種菌絲迅速放入原種培養(yǎng)基中央，使菌絲面緊貼瓶內(nèi)培養(yǎng)基料面，立即塞好棉塞，再依次接下一管。每支母種可轉(zhuǎn)接80～100支母種試管。接種完的試管，及時(shí)貼上標(biāo)簽，注明羊肚菌品種、級別、接種日期、接種人等，如圖15A所示。

注：一般每支母種試管可擴(kuò)大繁殖80～100支新管。擴(kuò)大母種第一次應(yīng)多些，以避免多次轉(zhuǎn)管，造成菌絲生活力降低，影響產(chǎn)量和質(zhì)量。一般要求轉(zhuǎn)管不要超過5次。

2.原種接種方法

原種培養(yǎng)基一般采用木屑、棉籽殼、秸稈等。將滅菌的原種培養(yǎng)基罐頭瓶或菌種瓶移入接種箱或潔凈工作臺，將母種試管用酒精棉擦拭外壁，拿入接種箱，在火焰上打開棉塞，右手拿接種鏟或大鑷子，并在火焰上燒紅待冷，再從母種管內(nèi)挑出豆粒大小一塊菌絲（附帶有培養(yǎng)基），打開原種培養(yǎng)基瓶薄膜，將母種菌絲迅速放入原種培養(yǎng)基中央，使菌絲面緊貼瓶內(nèi)培養(yǎng)基料面，立即蓋好瓶蓋，再依次接下一瓶。每支母種可接20～30瓶原種。接種完的菌種瓶，及時(shí)貼上標(biāo)簽，注明羊肚菌品種、級別、接種日期、接種人等。如圖15B所示。

圖15　接種方法圖示（引自徐錦堂1997）

注：培養(yǎng)時(shí)應(yīng)當(dāng)認(rèn)真檢查菌絲的純培養(yǎng)程度和菌絲長勢，保持純種培養(yǎng)，制作所用的容器要求使用透明度好的玻璃瓶。室內(nèi)要遮光或微弱的散射光即可。培養(yǎng)30天左右菌絲長滿瓶即可用于擴(kuò)繁栽培種。如暫時(shí)不用，要放在干燥、低溫、避光條件下短期貯存。

3.栽培種接種方法

由原種擴(kuò)大培養(yǎng)而成的栽培種（三級種）是為了加快羊肚菌繁育進(jìn)度，滿足大面積時(shí)的菌種需要，常以菌瓶或菌袋作為容器。其接種方法基本上和原種相同，所不同的是：原種用試管母種接種，而栽培種是用培養(yǎng)好的原種接種。首先將原種的菌種瓶在火焰上拔去瓶塞，用消過毒的鑷子去掉原種表面的菌膜（一般應(yīng)棄去瓶口部的1/3），用鑷子將洞穴擴(kuò)大，然后取一塊菌種，迅速移入滅過菌的栽培袋內(nèi)，接種完畢后，迅速將棉塞在火焰上燒灼后塞緊，扎好袋口。一般羊肚菌 瓶原種可擴(kuò)繁栽培種約100～130瓶。接好種后，根據(jù)接種羊肚菌的種類不同，放在適合于此菌絲的生長溫度而培養(yǎng)。一般培養(yǎng)菌絲體的溫度為22～28℃為宜，靈芝除外。接種完畢后將栽培袋移入恒溫箱，在25℃下培養(yǎng)25～30天，菌絲長滿后進(jìn)行栽培袋小量生產(chǎn)。一般香菇、平菇、冬菇、猴頭、木耳、銀耳的栽培種多用木屑、棉籽殼作培養(yǎng)料，蘑菇多用糞草做培養(yǎng)料。

注：原種在接栽培種時(shí)，原種瓶口的一層菌絲體應(yīng)挖去不用，且栽培種要求料塊不脫水干縮。菌絲體健壯有力、顏色純正，有清香味，無老化現(xiàn)象，無雜菌污染，有的種許可有少量原基，接入栽培料后，發(fā)菌快，長勢好，生活力強(qiáng)。

（二）培　養(yǎng)

羊肚菌是好氣性真菌，菌絲的生長需要新鮮的空氣，但不需要光，也就是說要在黑暗中生長，最適生長溫度22～26℃，在此溫度下生長最快，它在較低溫度下生長速度雖慢，但菌絲健壯有力、潔白。因此羊肚菌栽培種培養(yǎng)就需在通風(fēng)良好、接近黑暗的溫度條件下進(jìn)行。培養(yǎng)室內(nèi)需保溫性好，易通風(fēng)換氣，窗戶上掛暗色窗簾遮光，養(yǎng)菌前點(diǎn)燃硫磺熏蒸殺菌，然后再放入菌種培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中室溫保持在20～25℃、空氣相對濕度45%～60%為宜，當(dāng)菌絲吃料4～5厘米時(shí)，應(yīng)把溫度降低到25℃以下，讓菌絲健壯生長。如果持續(xù)高溫高濕即會引起污染，還會使菌絲生長稀疏無力，吐黃水。因此，在培養(yǎng)后期要加強(qiáng)通風(fēng)換氣，保持室內(nèi)空氣新鮮，防止菌絲在高溫缺氧條件下生長。同時(shí)若出現(xiàn)雜菌，應(yīng)及時(shí)淘汰。

（三）液體菌種的簡單制作及培養(yǎng)

液體菌指仿自然界把羊肚菌所需要的糖類、有機(jī)和無機(jī)含有氮素的化合物、無機(jī)鹽等一些微量元素等混合在水溶液中，通氣供氧進(jìn)行菌絲大量培養(yǎng)繁殖獲得菌種。根據(jù)其所用的培養(yǎng)容器及供氧方式，可分為搖瓶振蕩培養(yǎng)、淺盤靜置培養(yǎng)、發(fā)酵罐深層培養(yǎng)和發(fā)酵罐密閉氣培養(yǎng)等。一般將培養(yǎng)液裝入三角瓶中（約占1/5體積）培養(yǎng)。液體培養(yǎng)基可用上述母種培養(yǎng)基（不加瓊脂）配制，也可用玉米粉、豆餅粉、糖、無機(jī)鹽等配制。如：玉米粉1%，葡萄糖3%，酵母粉0.5%，磷酸二氫鉀0.1%，碳酸鈣0.2%，pH自然，121℃滅菌30分鐘。然后接種培養(yǎng)。

注：液體菌種具有生產(chǎn)量大、周期短、菌齡整齊、成本低、接種方便等特點(diǎn)，但若采用種子缸，發(fā)酵罐進(jìn)行深層通氣發(fā)酵，產(chǎn)生大量菌種，則存在生產(chǎn)中要求設(shè)備繁多、技術(shù)性強(qiáng)等特點(diǎn)。