二、二苯胺法

（一）實(shí)驗(yàn)原理

DNA酸解后生成嘧啶核苷酸、嘌呤、磷酸及脫氧核糖。脫氧核糖在酸性條件下脫水生成ω-羥基-γ-酮基戊醛，可與二苯胺作用呈藍(lán)色，在595nm有最大吸收值，待測樣品濃度在50～500μg/mL DNA之間，吸光度與DNA的濃度成線性關(guān)系。樣品中若含有一定量的RNA對測定影響不大，鹽類對測定有影響，蛋白質(zhì)、多糖類及其衍生物、芳香醛、羥基醛與二苯胺形成各種有色物質(zhì)，干擾測定。其反應(yīng)式如下：

（二）實(shí)驗(yàn)藥品

二苯胺試劑：稱取1g二苯胺溶于98mL冰醋酸中，加2mL濃硫酸，冰箱保存，供當(dāng)天使用。

（三）實(shí)驗(yàn)方法

1．標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

取與被測樣品相同來源的DNA純化制品，用定磷法測定純度、按純DNA含量配成500μg/mL溶液。吸取0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，補(bǔ)水到1.0mL，再加二苯胺試劑2.5mL，置沸水浴10min，冷水冷卻后，用分光光度計(jì)在波長“595nm”下，以空白管調(diào)零，測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)、純DNA量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2．樣品中DNA測定

樣品配成100～400μg/mL濃度。吸取1mL，加二苯胺2.5mL，同上操作，用蒸餾水作空白。從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出DNA量，再根據(jù)稀釋倍數(shù)算出樣品中DNA含量。

（四）實(shí)驗(yàn)記錄

1．標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2．實(shí)驗(yàn)記錄