實(shí)驗(yàn)五　X染色質(zhì)的標(biāo)本制作與觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

（1）掌握鑒定人類X染色質(zhì)的方法。

（2）了解X染色體失活的有關(guān)理論假說以及失活染色體上的基因所控制的遺傳性狀的特點(diǎn)。

二、實(shí)驗(yàn)用品

顯微鏡、載玻片、蓋玻片、牙簽、漱口杯（滅菌）、吸水紙、離心機(jī)、吸管、固定液（甲醇與冰醋酸的體積比為3∶1）、2．0g/L甲苯胺藍(lán)染色液、生理鹽水等。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

（1）取材：先漱口三次，將口腔內(nèi)雜物漱出，然后用牙簽的鈍面刮取口腔頰部黏膜細(xì)胞，將其放入盛有3mL生理鹽水的離心管中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞分散于生理鹽水中。

（2）離心收集細(xì)胞：以800～1000r/min進(jìn)行離心10min。

（3）固定：離心結(jié)束后，輕輕將上清液除去。留下的沉淀物用固定液固定10min。

（4）離心：1000r/min，離心10min。

（5）制備細(xì)胞懸液：去掉上清液，根據(jù)細(xì)胞沉淀的多少適量加入幾滴新配制的固定液，用吸管吹打成細(xì)胞懸液。

（6）滴片：用吸管將細(xì)胞懸液滴在載玻片上，在空氣中干燥。

（7）酸解：當(dāng)載玻片上的固定液全部揮發(fā)以后，在載玻片上滴加5mL鹽酸，處理10 min，然后用清水漂洗幾遍。

（8）染色：在20．0g/L甲苯胺藍(lán)染色液中染色30min。染色結(jié)束后，用清水漂洗以去掉浮色，在空氣中自然干燥。

（9）鏡檢：在油鏡下依次觀察細(xì)胞核著色均勻、核膜完整的細(xì)胞80～100個(gè)，計(jì)數(shù)具有靠近核膜邊緣的半月形X小體的細(xì)胞數(shù)。

【實(shí)驗(yàn)提示】

（1）首先在低倍顯微鏡下檢出細(xì)胞分散且染色均勻的視野，然后轉(zhuǎn)用高倍鏡和油鏡進(jìn)行仔細(xì)觀察。

（2）并非在所有的正常女性細(xì)胞中都能看到X染色質(zhì)，用正常女性的組織切片，統(tǒng)計(jì)200～400個(gè)沒有破損、形態(tài)正常的細(xì)胞，可觀察到具X染色質(zhì)的細(xì)胞比率為30%～50%。

（3）良好的標(biāo)本應(yīng)該具備以下條件：核質(zhì)呈網(wǎng)狀或細(xì)顆粒狀分布，核膜清晰，染色適度，細(xì)胞周圍無雜菌。X染色質(zhì)在鏡下觀察呈一濃染小體，其輪廓清楚，大小為1μm左右，常附在核膜邊緣或靠近內(nèi)側(cè)。形狀有微凸形、三角形、卵形、短棒形等。若X染色質(zhì)部在核膜的邊緣，就不容易與其他染色質(zhì)塊相區(qū)別。一般以在核膜內(nèi)緣檢測(cè)到為陽性。

（4）取口腔黏膜時(shí)，嚴(yán)防口腔中細(xì)菌的污染。

四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

描繪所觀察到的X染色質(zhì)的形態(tài)特征和在細(xì)胞中的分布情況。

宋陳玲