一、目的要求

植物病害標(biāo)本同其他生物標(biāo)本一樣，是生物性狀和分布的記載，植物病害標(biāo)本也是癥狀最好的描述，在科研、教學(xué)、科學(xué)普及及植物保護(hù)工作中都十分有用。 本實(shí)習(xí)主要通過采集和制作標(biāo)本，了解植物病害標(biāo)本采集要求，學(xué)會(huì)標(biāo)本采集與記錄，掌握植物病害標(biāo)本的制作和保存方法。

二、材料和用具

（一）實(shí)驗(yàn)材料

田間各種病害標(biāo)本。

（二）實(shí)驗(yàn)用具（藥品）

標(biāo)本夾、標(biāo)本箱、刀、剪、鋤、小玻瓶、標(biāo)本紙、紙袋、標(biāo)本簽、記錄本、塑料袋、95%的酒精、硫酸銅、亞硫酸銅、甲醛溶液、蒸餾水、記號(hào)筆等。

三、內(nèi)容和方法

（一）病害標(biāo)本的采集

采集時(shí)應(yīng)注意以下事項(xiàng)。

1.結(jié)合多種因素綜合考慮

要將采集地的地理生態(tài)條件與病害發(fā)生條件、病原物的生物特性綜合起來考慮。 如采集卵菌應(yīng)在潮濕低洼的地區(qū)或易積水結(jié)露的部位尋找；寄生性種子植物應(yīng)與寄主相聯(lián)系。 如列當(dāng)在高緯度地區(qū)雙子葉草本植物上寄生，獨(dú)腳金在低緯度地區(qū)單子葉植物上寄生。

2.標(biāo)本要求癥狀典型

完整病害標(biāo)本主要包括有病的根、莖、葉和果實(shí)等，好的標(biāo)本要有各受害部位在不同時(shí)期的典型癥狀，真菌病害標(biāo)本上最好要有子實(shí)體。 如柑橘炭疽病，葉片癥狀有葉斑型和葉枯型，果實(shí)癥狀有干腐型和濕腐型，還有枝梢上的枝枯型等。

3.標(biāo)本要求一定數(shù)量

每種標(biāo)本采集的件數(shù)不能太少，一般同類標(biāo)本要有5~10個(gè)重復(fù)，因?yàn)樵谥谱骱丸b定過程中常有損壞，多余的標(biāo)本還可以用于交流。

4.要做必要的記錄

記錄主要內(nèi)容包括寄主名稱、病害名稱、采集日期和地點(diǎn)、采集人姓名、主要發(fā)生情況和必要的生態(tài)因子。

（二）病害標(biāo)本的制作

從野外采回的標(biāo)本，除一部分用作分離鑒定外，對(duì)于典型的病害癥狀最好是先攝影，再壓制或浸漬保存。 壓制或浸漬保存的標(biāo)本盡可能保持其原有性狀，微小的標(biāo)本可以制成玻片，如雙層玻片，凹穴玻片或用其他小玻管、小袋收藏。

1.標(biāo)本干燥制作法

此方法比較簡(jiǎn)單且經(jīng)濟(jì)，標(biāo)本可以長(zhǎng)期保存，所以應(yīng)用最廣。 莖和葉可壓在吸水的標(biāo)本紙中，用標(biāo)本夾夾緊，日曬任其干燥。 不準(zhǔn)備做分離的標(biāo)本，可在50℃的烘箱中放2~3d，使其很快干燥。標(biāo)本干燥愈快，愈能保持原有的色澤。 夏季的溫度和濕度高，標(biāo)本容易發(fā)霉和變色，標(biāo)本紙的更換要勤，通常前3~4d每天換紙1~2次，以后每2~3d換1次，至完全干燥為止。 春、秋兩季則可減少換紙次數(shù)。 每次換紙時(shí)將標(biāo)本加以整理，經(jīng)過初步干燥后，標(biāo)本變軟而容易鋪展。 為了加快干燥，有些標(biāo)本可用熨斗或微波爐干燥，使其快速干燥而保持原來的色澤。 干燥的標(biāo)本可裝于玻盒、紙袋內(nèi)，也可塑封保存。

2.浸漬標(biāo)本制作法

此方法占地面積大，保存時(shí)間又有限，所以很少用于保存大量的標(biāo)本。浸漬法多半用于保存教學(xué)和示范用的標(biāo)本，適用于果實(shí)和其他含水量多的材料。 浸漬液種類很多，有純屬防腐性的，也有專為保持標(biāo)本原來色澤的。

（1）普通防腐性浸漬液

福爾馬林50m L，95%的酒精300m L，加水至2000m L。

（2）保存綠色標(biāo)本浸漬液

①醋酸銅浸漬液

以結(jié)晶醋酸銅逐漸加到50%的醋酸中，至飽和為止，將配成的原液用水稀釋3~4倍。將稀釋后的溶液加熱至沸騰，投入標(biāo)本，標(biāo)本的綠色最初會(huì)被漂去，經(jīng)3~4min，至綠色恢復(fù)后，將標(biāo)本取出，用清水漂凈，保存于5%的福爾馬林中，或壓制成干標(biāo)本亦可。

②硫酸銅及亞硫酸浸漬法

標(biāo)本在5%的硫酸銅溶液中浸泡6~24h，取出后用清水漂洗數(shù)小時(shí)，然后保存于亞硫酸中（用45m L含5%~6%二氧化硫的亞硫酸溶液加水1000m L配成），亞硫酸浸漬液亦可用以下方法配成：取無水亞硫酸鈉16g，溶于1000m L水中，取濃硫酸20m L徐徐滴入上述溶液中，配成的溶液在密封條件下可以貯藏。 本法用于保持綠色葉片及果實(shí)等，顏色比醋酸銅法自然，但應(yīng)注意密封瓶口，或每年更換一次亞硫酸浸漬液。

（3）保存黃色和橘紅色標(biāo)本浸漬液

含有葉黃素和胡蘿卜素的果實(shí)，如杏、紅辣椒等用亞硫酸保存。 用市售含5%~6%二氧化硫的亞硫酸按4%~10%再稀釋成稀溶液使用。 對(duì)各種標(biāo)本的適宜濃度要通過實(shí)驗(yàn)才能找出。 亞硫酸過濃，有漂白作用，不能保色，亞硫酸過稀防腐能力不足。 在需用較低濃度時(shí)，可加少量酒精增加防腐能力。 溶液中加甘油少許，可以防止標(biāo)本開裂。

（4）保存紅色標(biāo)本浸漬液

標(biāo)本的紅色是由花青素形成的，花青素能溶于水和酒精，因此，保存標(biāo)本的紅色是比較困難的。保存紅色常用的浸漬液有下列3種，以瓦查浸漬液較好。

①赫斯婁浸漬液

氯化鋅50g，福爾馬林25m L，甘油25m L，加水至1000m L。

溶氯化鋅于熱水中，加入福爾馬林及甘油，如有沉淀，用其清液。

②波爾浸漬液

以二氧化硫通過福爾馬林至飽和為止，稀釋20~40倍使用。

③瓦查浸漬液

硝酸亞鈷15g，氯化錫10g，福爾馬林25m L，加水至2000m L。

此溶液可用于保存草莓、辣椒以及其他組織的紅色，標(biāo)本洗凈后在此溶液中浸泡14d，然后保存于下列浸漬液中。

福爾馬林10m L，95%的酒精10m L，亞硫酸（飽和溶液）30~50m L，加水至1000m L。

3.標(biāo)本瓶瓶口封口法

（1）暫時(shí)封口法

以蜂蠟及松香各1份，分別熔化混合，加入少量的凡士林調(diào)成膠狀物，涂于瓶蓋邊緣，將蓋壓緊。亦可用明膠4份在水中浸數(shù)小時(shí)，將水濾去，加熱熔化，拌入1份石蠟，熔化混合后成為膠狀物，趁熱使用。

（2）永久封口法

以酪膠及消石灰各1份混合，加水調(diào)成糊狀物，用于封蓋，干燥后，由于酪酸鈣的硬化而密封。亦可用明膠28g在水中浸數(shù)小時(shí)，將水濾去加熱熔化，混入0.324g的重鉻酸鉀及充分的熟石膏使成糊狀，即可用于封口。

（三）標(biāo)本的整理、排列和保藏

制成的標(biāo)本，經(jīng)過整理和登記，然后以一定的系統(tǒng)排列和保藏。

1.標(biāo)本盒保藏

教學(xué)和示范的病害標(biāo)本，除浸漬標(biāo)本外，用玻面的標(biāo)本盒保藏比較方便。玻面標(biāo)本盒大小不一，適宜的大小是200mm×280mm×（15~30）mm。標(biāo)本盒中先鋪一層棉花，棉花上放標(biāo)本和標(biāo)簽，注明寄主植物和寄生菌的名稱，然后加玻蓋。 棉花中可加少許樟腦粉或其他藥劑驅(qū)蟲。

2.蠟葉標(biāo)本紙保藏

取重磅道林紙，按不同方式折成紙?zhí)?，紙?zhí)状笮「鶕?jù)標(biāo)本的大小決定。標(biāo)本裝在紙?zhí)字?，紙?zhí)咨蠈懨麒b定記錄，或?qū)㈣b定記錄的標(biāo)簽貼在紙?zhí)咨稀?/p>

3.塑封保藏

將標(biāo)本平整夾于塑料內(nèi)，通過塑封機(jī)加熱排凈空氣并密封。

4.標(biāo)本瓶保藏

浸漬的標(biāo)本放在標(biāo)本瓶?jī)?nèi)保藏，為防止標(biāo)本下沉或上浮，可將標(biāo)本綁在玻璃條上然后再放入標(biāo)本瓶中。 蓋好瓶口后滴加石蠟封口，然后貼上標(biāo)簽。

四、實(shí)習(xí)時(shí)間

3天。

五、作業(yè)與思考題

1.病害標(biāo)本是否一定要壓制或浸漬保存？

2.仁果、漿果病害標(biāo)本應(yīng)如何保存？

3.每人上交10份已鑒定好的標(biāo)本。

附：植物病害標(biāo)本采集和鑒定記錄