實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目二　親和層析法檢測尿液HCG

學(xué)習(xí)目標(biāo)

【知識(shí)目標(biāo)】

（1）能用自己的語言描述親和層析法檢測尿液HCG的原理。

（2）能夠迅速而準(zhǔn)確地陳述親和層析法檢測尿液HCG實(shí)驗(yàn)操作的要點(diǎn)。

（3）能夠準(zhǔn)確鑒別尿液HCG檢測結(jié)果，并能說明其臨床意義。

【能力目標(biāo)】

（1）能夠正確完成金標(biāo)試紙檢測尿液HCG的各項(xiàng)操作內(nèi)容，做到步驟正確、動(dòng)作連貫協(xié)調(diào)、內(nèi)容全面無遺漏。

（2）能夠正確指導(dǎo)受試者采集尿液，并說明注意事項(xiàng)。

（3）能夠正確分析除妊娠外哪些疾病還可能導(dǎo)致尿液HCG檢測結(jié)果呈陽性。

案例引導(dǎo)

患者，女，28歲，婚齡2年。最近一個(gè)月食欲差、偶有惡心，早晨起床后嘔吐，有時(shí)頭痛，嗜睡，體溫37℃。結(jié)合個(gè)人情況，采用早早孕HCG試紙檢測尿樣，結(jié)果顯示兩條紫紅色條帶。請(qǐng)據(jù)此判斷檢測結(jié)果，并給出臨床診斷。

（提示：妊娠實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈陽性）

【實(shí)驗(yàn)原理】

人絨毛膜促性腺激素（HCG）是一種糖蛋白，包含一條和FSH（促卵泡成熟激素）具有同源性的α鏈和一條高度特異的β鏈。它由胎盤的滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌。

本實(shí)驗(yàn)采用兩點(diǎn)夾心固相親和層析法定性檢測尿液中的HCG。在層析試紙條的檢測區(qū)預(yù)包被有針對(duì)HCG的α鏈（α亞基）制備的抗HCG抗體，質(zhì)控區(qū)預(yù)包被有抗鼠IgG抗體，同時(shí)在試紙條下端還吸附有經(jīng)膠體金（紫紅色）標(biāo)記針對(duì)HCGβ鏈（β亞基）制備的抗HCG抗體。

檢測時(shí)，當(dāng)待測尿液中含有一定量的HCG時(shí)，HCG通過層析作用到達(dá)金標(biāo)位置，HCG的β鏈與試紙條上預(yù)包被的膠體金標(biāo)記抗β－HCG抗體發(fā)生免疫反應(yīng)，結(jié)合成抗原－抗體復(fù)合物，繼續(xù)向上遷移到達(dá)檢測區(qū)，HCG的α鏈與預(yù)包被的抗α－HCG抗體發(fā)生免疫反應(yīng)，形成夾心式復(fù)合物，這樣就把金標(biāo)通過HCG橋連到檢測線上。達(dá)到一定量后，金標(biāo)顯色為肉眼可見的水平，呈現(xiàn)為一條紫紅色條帶。

多余的金標(biāo)繼續(xù)泳動(dòng)到控制線位置，由于和鼠源性抗β－HCG單抗發(fā)生免疫反應(yīng)，從而橋連金標(biāo)顯色，又出現(xiàn)一條紫紅色條帶，這樣就得到陽性結(jié)果。

當(dāng)尿液或血清中不含HCG時(shí)，金標(biāo)和檢測區(qū)抗體不發(fā)生橋連，僅質(zhì)控區(qū)顯色，出現(xiàn)一條紫紅色條帶，這樣就得到了陰性結(jié)果。當(dāng)檢測線和質(zhì)控線均不顯色時(shí)，表示試劑盒無效（圖3－5）。

圖3－5　親和層析法定性檢測尿液中HCG的原理示意圖

【實(shí)驗(yàn)器材】

一次性潔凈尿杯，HCG膠體金法檢測試紙條。

【藥品及試劑】

新鮮尿樣，其余試劑隨試紙條配備。

【試劑配制】

采用一次性潔凈尿杯收集任何時(shí)間的新鮮尿樣（第一次晨尿最佳）。若不能及時(shí)送檢，尿樣標(biāo)本在2～8℃冷藏可保存48h。長期保存需冷凍于－20℃的條件下，檢測前應(yīng)將試劑和尿樣標(biāo)本恢復(fù)至室溫（20～30℃）。

操作流程

【操作步驟】

檢測前須將尿液或血清、血漿標(biāo)本及試紙條恢復(fù)至室溫（20～30℃）。

（1）撕開鋁箔袋，取出試紙，在1h內(nèi)應(yīng)盡快使用。

（2）使用時(shí)將試紙標(biāo)有指示箭頭的一端浸入尿液中，液面不得超過試紙條箭頭下端的終止線。

（3）保持10s后取出平放；或直接將尿液2～3滴加到指示箭頭端。

（4）等待色條帶的出現(xiàn)，2～5min時(shí)直接觀察結(jié)果，5min后判定結(jié)果為無效。

【實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理及結(jié)果分析】

（1）陽性（＋）：出現(xiàn)兩條紫紅色條帶，一條位于檢測區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）內(nèi)。

（2）陰性（－）：僅在質(zhì)控區(qū)內(nèi)出現(xiàn)一條紫紅色條帶，在檢測區(qū)內(nèi)無紅色條帶出現(xiàn)。

（3）無效：5min后在質(zhì)控區(qū)無紫紅色條帶出現(xiàn)，提示操作不當(dāng)，如樣本量不夠、層析過程不正?；蛟嚰垪l已過有效期或試紙條已經(jīng)損壞等。

【注意事項(xiàng)】

（1）本品為一次性使用，原包裝應(yīng)存儲(chǔ)于室溫為4～30℃的條件下。

（2）試紙超過有效期后請(qǐng)勿使用。

（3）打開鋁箔袋后，請(qǐng)勿將試紙條置于空氣中過久，以免受潮。

（4）當(dāng)HCG濃度很高時(shí)，檢測線顏色可能變淺，屬于正?，F(xiàn)象。

（5）若受試者懷疑有受孕可能，而尿液檢測結(jié)果呈陰性，可在48～72h后重新收集晨尿再次測定。

（6）由于檢測的標(biāo)本尿液具有潛在危險(xiǎn)性，故應(yīng)作為傳染性試劑處理。

【實(shí)驗(yàn)意義】

1.意義

（1）早期妊娠診斷：通常受精后7～10d，血清或尿液中就能檢測到HCG，以后HCG的濃度快速上升；到孕后10～12周達(dá)到最高峰。由于HCG在受精后很快出現(xiàn)，并且隨后濃度快速升高，因此，HCG可以作為懷孕早期診斷的很好的標(biāo)記物。

（2）流產(chǎn)診斷和監(jiān)測。

①先兆流產(chǎn)：若尿液中HCG濃度仍維持在高水平，一般不會(huì)發(fā)生流產(chǎn)。在保胎治療過程中，如HCG濃度不斷增高，則說明保胎有效。如果HCG濃度持續(xù)降低，說明保胎無效，不必再繼續(xù)進(jìn)行保胎治療，應(yīng)盡早處理，以免死胎滯留過久而發(fā)生宮內(nèi)感染。

②不完全流產(chǎn)：不完全流產(chǎn)時(shí)，宮腔內(nèi)尚有殘留的胎盤組織，HCG檢查結(jié)果仍可呈陽性；完全流產(chǎn)或出現(xiàn)死胎時(shí)HCG檢查結(jié)果由陽性轉(zhuǎn)為陰性，因此，檢查HCG可作為保胎治療和判斷流產(chǎn)的參考依據(jù)。

（3）異位妊娠的診斷。

（4）妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病的診斷與病情觀察。

2.其他

子宮內(nèi)膜增生、子宮腫瘤、葡萄胎、睪丸間質(zhì)細(xì)胞癌、肺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌等患者血液和尿液中HCG濃度也明顯增高，這可作為這些腫瘤的早期診斷指標(biāo)。當(dāng)HCG作為腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用時(shí)，必須結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他檢查結(jié)果綜合分析才能有意義，也可用于對(duì)絨毛膜上皮細(xì)胞癌、葡萄胎手術(shù)后化療效果的觀察標(biāo)志，是有效隨訪監(jiān)測的手段。

能力檢測

一、單項(xiàng)選擇題

1.下列關(guān)于HCG描述錯(cuò)誤的是（　?。?。

A.是一種性腺激素　　　　　　B.是一種糖蛋白

C.含有一條α鏈和一條β鏈　　D.在人體受精后由胎盤的滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌

E.含有兩條β鏈

2.下列哪項(xiàng)可能不會(huì)導(dǎo)致HCG濃度增高？（　?。?/p>

A.子宮腫瘤　　B.葡萄胎　　　C.肝硬化

D.卵巢癌　　　E.子宮內(nèi)膜增生

3.本實(shí)驗(yàn)檢測HCG所采用的方法屬于下列哪種？（　　）

A.醋酸纖維素薄膜電泳　B.分配層析　　C.離子交換層析

D.凝膠層析　　　　　　E.親和層析

4.本實(shí)驗(yàn)中，下列哪種情況可以判定結(jié)果為陽性？（　?。?/p>

A.出現(xiàn)兩條色帶　　B.出現(xiàn)一條色帶　　C.沒有色帶出現(xiàn)

D.出現(xiàn)三條色帶　　E.出現(xiàn)四條色帶

5.在檢測區(qū)呈現(xiàn)的紫紅色條帶含下列哪種復(fù)合物？（　　）

A.抗β－HCG抗體

B.抗α－HCG抗體

C.（抗α－HCG）－HCG－（抗β－HCG）

D.抗β－HCG抗體與鼠源性抗體的復(fù)合物

E.抗α－HCG抗體和抗β－HCG抗體的復(fù)合物