第三節(jié)　真菌的培養(yǎng)

一、培養(yǎng)條件

真菌對外界環(huán)境適應(yīng)力強，對營養(yǎng)要求不高，在一般培養(yǎng)基上均能生長，常用弱酸性的沙堡弱培養(yǎng)基或馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基，最適培養(yǎng)溫度為22℃～28℃，深部感染的真菌，如寄生于動物內(nèi)臟的病原性真菌則在37℃時生長最好。pH在3～6均可生長，體外培養(yǎng)的最適pH為5.5～6.0；適宜生長在潮濕的環(huán)境中，需氧條件下生長良好（酵母菌必須在厭氧條件下才能發(fā)酵產(chǎn)生酒精）；少數(shù)是嚴(yán)格厭氧菌，如反芻動物瘤胃中的真菌。

二、培養(yǎng)方法

真菌的酵母細(xì)胞、小段斷裂的菌絲和孢子（無性或有性孢子），都可以生長發(fā)育成新的個體。酵母菌的分離方法同細(xì)菌，可在固體平板上進(jìn)行劃線分離或稀釋法得到其純培養(yǎng)。菌絲片段、孢子均可通過劃線法和稀釋法得到純菌種。產(chǎn)生子實體的真菌還可以通過無菌操作取出子實體內(nèi)部的一小塊組織，直接放在適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，可獲得純菌種。實驗室中進(jìn)行菌種分離、菌種培養(yǎng)和研究時常使用瓊脂斜面和瓊脂平板，真菌在其上呈現(xiàn)菌落或菌苔生長，便于觀察和分離；還可以采用載片濕室培養(yǎng)法培養(yǎng)真菌（圖4-8），培養(yǎng)后可直接在顯微鏡下觀察載片上真菌的菌絲及孢子形態(tài)，以鑒定真菌。真菌制曲及生產(chǎn)發(fā)酵飼料時所用的發(fā)酵培養(yǎng)基以谷糠、麩皮等農(nóng)副產(chǎn)品為原料，按真菌營養(yǎng)要求合理搭配，加適量的水拌勻，經(jīng)過蒸煮滅菌后，接入菌種進(jìn)行培養(yǎng)。生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白飼料常采用液體培養(yǎng)方法。

圖4-8　真菌的載片濕室培養(yǎng)

三、培養(yǎng)特征

酵母菌細(xì)胞在固體培養(yǎng)基上形成的菌落多數(shù)為乳白色，少數(shù)是黃色或紅色。菌落表面光滑、濕潤和黏稠，與某些細(xì)菌的菌落相似，但一般比細(xì)菌的菌落大而厚。酵母菌細(xì)胞生長在培養(yǎng)基的表面，菌體容易挑起。有些酵母菌表面是干燥粉狀的，有些種培養(yǎng)時間長了，菌落呈皺縮狀，還有些種可以形成同心環(huán)狀等。

霉菌的菌落比細(xì)菌、酵母菌的都要大，主要有絨毛狀、絮狀和蜘蛛網(wǎng)狀等形狀，為絲狀菌落。菌落最初呈淺色或白色，當(dāng)孢子逐漸成熟，菌落相應(yīng)地呈黃、綠、青、黑、橙等顏色，有的產(chǎn)生色素，使菌落背面也帶有顏色或使培養(yǎng)基變色。