任務(wù)5　檸檬酸發(fā)酵

一、相關(guān)知識

黑曲霉的適宜生長溫度為35℃，適宜產(chǎn)酸溫度是26～28℃。若溫度太高，容易形成雜酸等副產(chǎn)物且菌體易衰老；若溫度太低，發(fā)酵周期被延長。

黑曲霉長菌的最適pH為中性，而產(chǎn)酸的最適pH在2．0～2．5。因此，菌蓋形成之后，在菌蓋下面有一個低pH區(qū)域，菌體合成檸檬酸的活動在這低pH區(qū)域內(nèi)進行，所以不應(yīng)該攪動發(fā)酵液，避免低值區(qū)域的pH上升長菌而不產(chǎn)酸。

二、實訓(xùn)器材

微生物實驗室常用器材，擴大培養(yǎng)的實驗室種子，玉米發(fā)酵糖液。

三、實訓(xùn)步驟

1．玉米粉發(fā)酵糖液滅菌

分裝發(fā)酵糖液于250mL錐形瓶中，每瓶裝不多于1／2的體積。用8層紗布做成通氣塞，外面用牛皮紙包扎好，高壓蒸汽滅菌。

2．接種

將培養(yǎng)好的實驗室種子液按無菌玉米粉水解糖液體積的10%接入無菌水解糖液中。

3．發(fā)酵

接種后，去掉錐形瓶上的牛皮紙，攤開通氣塞，用繩子把紗布扎好。將錐形瓶放入恒溫振蕩培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度維持在35℃，濕度75%。約20h可出現(xiàn)灰白色、很薄的菌膜。維持72h左右，以促進孢子發(fā)芽及菌體發(fā)育，菌膜完全形成，相當厚且有皺褶。自接種后72h起進入產(chǎn)酸期，這時菌體代謝速率高，耗糖快，發(fā)酵液酸度急劇升高，并釋放出大量熱，此時調(diào)節(jié)溫度在26～28℃，濕度仍在75%以上，以利于檸檬酸的形成。

四、思考題

（1）簡述檸檬酸的生產(chǎn)過程。

（2）搖瓶的瓶塞與培養(yǎng)基的瓶塞、菌種管的管塞為何不同？