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        目標蛋白質(zhì)的測定

        時間:2023-02-17 理論教育 版權反饋
        【摘要】:目前尚沒有任何一種方法能夠直接分析混合蛋白質(zhì)樣品中某種專一蛋白質(zhì),但是已經(jīng)有一些方法可以間接地對樣品中蛋白質(zhì)的種類、含量及翻譯后修飾特性進行分析,如蛋白電泳染色分析、免疫印跡分析技術及放射免疫分析技術等。
        目標蛋白質(zhì)的測定_分子生物學實驗手

        目前尚沒有任何一種方法能夠直接分析混合蛋白質(zhì)樣品中某種專一蛋白質(zhì)(即目標蛋白質(zhì)),但是已經(jīng)有一些方法可以間接地對樣品中蛋白質(zhì)的種類、含量及翻譯后修飾特性進行分析,如蛋白電泳染色分析、免疫印跡分析技術及放射免疫分析技術等。本章介紹兩種常用的分析方法:蛋白質(zhì)的十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)與免疫印跡法(Western blotting)。

        SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳是膠體電泳的一種,常用于生物化學、鑒識科學、遺傳學和分子生物學等領域的分析技術,此項技術是將蛋白質(zhì)溶液與SDS(十二烷基磺酸鈉)混合,SDS為界面活性劑會破壞蛋白質(zhì)的二級結構使其變性,并包覆變性蛋白質(zhì),使其帶有一致的負電荷,這樣可以利用樣品中蛋白質(zhì)分子量大小的不同,使其在電泳膠中分離。

        將電泳分離的蛋白質(zhì)組分轉移到固定膜,常用的固定膜有硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯(polyvinylidene difluoride,PVDF)膜上,然后以特異性抗體酶標二抗為探針,通過抗體-抗原反應及相應酶的顯色系統(tǒng)將目標蛋白質(zhì)(靶抗原)顯示出來,稱蛋白質(zhì)免疫印跡法。

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