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        測定常見的失控原因及處理

        時(shí)間:2023-03-12 理論教育 版權(quán)反饋
        【摘要】:主要預(yù)防措施是避免來自標(biāo)本的血紅蛋白、免疫球蛋白、乳鐵蛋白、肝素、一些激素和來自標(biāo)本處理中的去垢劑、有機(jī)溶劑等的抑制作用。陰性質(zhì)控樣本常見的失控原因:主要為擴(kuò)增產(chǎn)物的污染和(或)臨床標(biāo)本的核酸提取過程中發(fā)生的標(biāo)本間的交叉污染。

        陽性質(zhì)控樣本常見的失控原因:①核酸提取中的隨機(jī)誤差,如核酸提取中的丟失、有機(jī)溶劑去除不徹底、標(biāo)本中擴(kuò)增抑制物的殘留等;②儀器的問題,如擴(kuò)增儀孔間溫度的不均一性、孔內(nèi)溫度與所示溫度的不一致等;③試劑的問題,如Taq酶和(或)反轉(zhuǎn)錄酶的失活、探針的純度及標(biāo)記效率和核酸提取試劑的效率等。主要預(yù)防措施是避免來自標(biāo)本的血紅蛋白、免疫球蛋白、乳鐵蛋白、肝素、一些激素和來自標(biāo)本處理中的去垢劑、有機(jī)溶劑等的抑制作用。建議:①純化核酸時(shí)使用酚-氯仿提取、二氧化硅吸附可有效去除臨床標(biāo)本中自帶的干擾,但不能消除提取過程中摻入的去垢劑和有機(jī)溶劑的干擾;②對臨床標(biāo)本采取雙份測定,這樣可以避免很多操作過程中的隨機(jī)誤差;③對于含有抑制物的標(biāo)本,在靶核酸濃度足夠高的情形下可對標(biāo)本進(jìn)行稀釋后測定;④使用內(nèi)質(zhì)控(見本章前述)。

        陰性質(zhì)控樣本常見的失控原因:主要為擴(kuò)增產(chǎn)物的污染和(或)臨床標(biāo)本的核酸提取過程中發(fā)生的標(biāo)本間的交叉污染。預(yù)防措施主要包括:①建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室分區(qū);②嚴(yán)格操作程序;③使用帶濾芯的槍頭;④使用“防污染”(含UNG)的PCR試劑;⑤避免治療藥物對實(shí)驗(yàn)的干擾,如結(jié)核桿菌、淋球菌患者經(jīng)抗菌藥物治療后樣本中病原體及核酸濃度均降低,PCR檢測陽性率降低。

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