【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

以血液凝固時(shí)間作為指標(biāo)，熟悉血液凝固的影響因素，加深對(duì)生理止血過程的理解。

【實(shí)驗(yàn)原理】

血液凝固是一個(gè)酶的有限水解激活過程，在此過程中有多種凝血因子參與。根據(jù)凝血過程啟動(dòng)時(shí)激活因子來源不同，可將血液凝固分為內(nèi)源性激活途徑和外源性激活途徑。內(nèi)源性激活途徑是指參與血液凝固的所有凝血因子在血漿中，外源性激活途徑是指受損的組織中的組織因子進(jìn)入血管后，與血管內(nèi)的凝血因子共同作用而啟動(dòng)的激活過程。

【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】

家兔。

【實(shí)驗(yàn)用品】

20%氨基甲酸乙酯溶液，肝素（8U／ml），2%草酸鉀溶液，生理鹽水，液狀石蠟，肺組織液（取大鼠肺剪碎，洗凈血液，浸泡于3～4倍量的生理鹽水中，過濾收集的濾液即成肺組織液，存冰箱中備用），兔手術(shù)臺(tái)，常規(guī)手術(shù)器械，動(dòng)脈夾，動(dòng)脈插管（或細(xì)塑料導(dǎo)管），注射器，試管8支，小燒杯2個(gè)，試管架，竹簽1束（或細(xì)試管刷），秒表。

【實(shí)驗(yàn)步驟】

1．麻醉和固定　耳緣靜脈注射氨基甲酸乙酯溶液，按5ml／kg的量，將兔麻醉，仰臥固定于兔手臺(tái)上。

2．頸部手術(shù)　正中切開頸部，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，遠(yuǎn)心端用線結(jié)扎阻斷血流，近心端夾上動(dòng)脈夾。在靠近左總動(dòng)脈遠(yuǎn)心端斜向近心端剪一小切口，插入動(dòng)脈插管（或細(xì)塑料導(dǎo)管），結(jié)扎導(dǎo)管以備取血。

【觀察項(xiàng)目】

1．取兔動(dòng)脈血10ml，注入兩個(gè)小燒杯內(nèi)，一杯靜置，另一杯用帶有橡皮刷的玻棒或竹簽（也可用小號(hào)試管刷）輕輕攪拌，數(shù)分鐘后，玻棒或竹簽上結(jié)成紅色血團(tuán)。用水沖洗，觀察纖維蛋白形狀。然后比較兩杯的凝血情況。

2．打開動(dòng)脈夾，準(zhǔn)備好的每支試管中滴入兔血2ml，即刻開始計(jì)時(shí)，每隔15s傾斜一次，觀察血液是否凝固，至血液成為凝膠狀不再流動(dòng)為止，記錄所經(jīng)歷的時(shí)間。6、7、8號(hào)試管加入血液后，用拇指蓋住試管口將試管顛倒兩次，使血液與藥物混合。觀察血液是否發(fā)生凝固及發(fā)生凝固的時(shí)間，把結(jié)果紀(jì)錄于表2－2中。

表2－2　不同因素對(duì)血液凝固的影響

3．如果加肝素和草酸鉀的試管不出現(xiàn)血凝，可再向兩管內(nèi)分別加入0．025mol／L的CaCl2溶液2～3滴，觀察血液是否發(fā)生凝固？

【注意事項(xiàng)】

1．采血的過程盡量要快，以減少計(jì)時(shí)的誤差。對(duì)比實(shí)驗(yàn)的采血時(shí)間要緊接著進(jìn)行。

2．判斷凝血的標(biāo)準(zhǔn)要力求一致。一般以傾斜試管達(dá)45°時(shí)，試管內(nèi)血液不見流動(dòng)為準(zhǔn)。

3．每支試管口徑大小及采血量要相對(duì)一致，不可相差太大。

【思考題】

1．肝素和草酸鉀皆能抗凝，其機(jī)制一樣嗎？為什么？

2．如何加速或延緩血液凝固？試闡明機(jī)制。

3．分析上述各因素影響凝固時(shí)間的機(jī)制。

4．正常人體內(nèi)血液為什么不發(fā)生凝固？

5．如何認(rèn)識(shí)纖維蛋白原在凝血過程中的作用？

（劉海云　蔡少華）