微生物比濁法效價(jià)檢測(cè)有二劑量法及校正曲線法兩種試驗(yàn)設(shè)計(jì)，前者設(shè)計(jì)較為合理而精密，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，可估計(jì)試驗(yàn)的誤差；后者設(shè)計(jì)不夠?qū)ΨQ，精密度差，試驗(yàn)結(jié)果亦不易估計(jì)誤差。

（一）二劑量法的試驗(yàn)設(shè)計(jì)

微生物比濁法效價(jià)檢測(cè)方法的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，除一般的微生物檢測(cè)要求外，還有以下基本要點(diǎn)。

1．基本要點(diǎn)

（1）培養(yǎng)條件的控制：在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)用大試管必須規(guī)格一致、質(zhì)地相同（最好用同一牌號(hào)、同一批號(hào)的產(chǎn)品）；恒溫水溫箱的水溫要求均勻，可在水浴兩端安裝電動(dòng)攪拌機(jī)各一臺(tái)，連續(xù)攪拌，使溫度均勻。各批樣品的對(duì)照管與樣品管，在水浴中放置位置完全按正交拉丁方排列。

（2）細(xì)菌生長(zhǎng)誤差的控制：接種細(xì)菌后的培養(yǎng)液，分裝至各管前，宜用冰水冷卻，在培養(yǎng)終結(jié)時(shí)，應(yīng)將各管同時(shí)自恒溫水溫箱中取出后，也應(yīng)立即冷卻，然后再在各管中，加入12%甲醛液各1ml。

（3）測(cè)量時(shí)間的控制：測(cè)量吸收度時(shí)，各管應(yīng)先充分振搖，將菌液移入吸收池內(nèi)后，再靜置2～3min（一般用2min）讀數(shù)。

（4）吸收池的位置：吸收池應(yīng)有記號(hào)，每次測(cè)定吸收度時(shí)，方向應(yīng)相同，吸收池的位置，宜放在離光檢測(cè)器遠(yuǎn)端。

（5）培養(yǎng)液、緩沖液、菌液、滅菌生理鹽水、稀釋樣品用蒸餾水、試驗(yàn)培養(yǎng)中的菌液，以及各種稀釋用玻璃儀器、吸收池等，都必須盡量防止被毛點(diǎn)、纖毛等污染。

2．二劑量法的操作及誤差統(tǒng)計(jì)分析

（1）標(biāo)準(zhǔn)品溶液及供試品溶液的制備：可按各品種的具體規(guī)定，稀釋制備。

（2）比濁法試驗(yàn)用培養(yǎng)液的接種：接種試驗(yàn)菌的量，需作預(yù)測(cè)試驗(yàn)，使S1、S2管，經(jīng)培養(yǎng)后（37℃，一般4h），吸收度A（D光密度）在0．3～0．5為適當(dāng)。

（3）標(biāo)準(zhǔn)品溶液及供試品溶液的分裝：取備妥的大試管16支，分配dS14支，dS24支，dT14支及dT24支，分別作好標(biāo)記。將標(biāo)準(zhǔn)品溶液dS1、dS2及供試品溶液dT1、dT2各1ml按批號(hào)加入相應(yīng)的大試管中。注意：加入溶液時(shí)，均在有標(biāo)記處沿管壁移入，以便在分裝培養(yǎng)液時(shí)，可沿此處管壁流入，將抗生素充分洗入培養(yǎng)液內(nèi)。

（4）分裝：比濁試驗(yàn)用的培養(yǎng)液，接種試驗(yàn)菌后經(jīng)冷卻，用移液管或其他分裝器，分裝至大試管中，每管20ml，此分裝量每管務(wù)求一致，其差異愈小則試驗(yàn)的精密度愈高。注意：主要為各管一致，而不需絕對(duì)量正確。移入培養(yǎng)液時(shí)，按加入樣品溶液的標(biāo)記處稍上方，沿管壁流入，立即振搖，使抗生素溶液與培養(yǎng)液混合均勻。

（5）培養(yǎng)：各大試管在培養(yǎng)過程中，不用棉塞，宜用鋁蓋或用25ml小燒杯（內(nèi)襯濾紙片一張）覆蓋。在37℃培養(yǎng)4h。

（6）培養(yǎng)終結(jié)及殺菌：培養(yǎng)終結(jié)時(shí)，應(yīng)將各大試管同時(shí)取出，立即置冷水浴中冷卻在各大試管內(nèi)加入12%甲醛液1ml立即振搖。注意：加入量務(wù)求各大試管一致。

（7）測(cè)量：取未經(jīng)接種的比濁試驗(yàn)用培養(yǎng)液20ml，加蒸餾水1ml，12%甲醛液1ml搖勻，作為空白，在適當(dāng)?shù)姆止夤舛扔?jì)上，波長(zhǎng)530nm處，測(cè)量各大試管內(nèi)培養(yǎng)物的吸收度。每管在測(cè)量前應(yīng)充分振搖，使管底的菌沉淀物全部搖散均勻，移入吸收池內(nèi)，并用此培養(yǎng)物沖洗吸收池3次，然后再用擦鏡頭紙擦凈吸收池外壁，置儀器吸收池架上，放置2或3min，讀取吸收度。

（8）計(jì)算結(jié)果及誤差統(tǒng)計(jì)分析：比濁法效價(jià)測(cè)定二劑量法結(jié)果的計(jì)算，可照管碟法效價(jià)測(cè)定二劑量法結(jié)果的計(jì)算式計(jì)算，亦可用誤差統(tǒng)計(jì)分析方法（無(wú)碟間差異），求出效價(jià)、可信限及可信限率，以檢驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

（二）校正曲線法

共用15管培養(yǎng)液，每一個(gè)劑量濃度用3管，每一樣品用3管培養(yǎng)液。其他操作技術(shù)均與二劑量法相同。

1．效價(jià)的計(jì)算　求出各劑量點(diǎn)的吸收度的平均值，取單周半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙，將吸收度用算術(shù)刻度，劑量濃度用對(duì)數(shù)刻度，標(biāo)出5點(diǎn)位置，連成校正曲線，也可用下式計(jì)算得最高最低吸收度值，兩點(diǎn)直接繪成校正曲線。

L＝（3a十2b＋c－e）／5

H＝（3e十2d＋c－a）／5

式中：L為校正曲線最低濃度的計(jì)算吸收度值；H為校正曲線最高濃度的計(jì)算吸收度值；a、b、c、d、e為校正曲線自低劑量至高劑量，依次各濃度的平均吸收度值。

2．樣品效價(jià)　計(jì)算樣品管吸收度的平均值，自校正曲線上，求得抗生素的含量，再乘以樣品的稀釋度，即得樣品中抗生素的含量。