大腸桿菌培養(yǎng)的常用方法，如表3-4所示。

表3-4 各種培養(yǎng)方法比較

一、平板固體培養(yǎng)

（一）劃線培養(yǎng)

【材料】

1．菌 長(zhǎng)有細(xì)菌的平板、甘油凍存管、轉(zhuǎn)化完畢的感受態(tài)細(xì)胞等。

2．物品 接種針、煤氣燈或酒精燈、加入了抗生素的新LB平板。

【操作步驟】

（二）涂布培養(yǎng)

【材料】

1．菌液

2．物品 涂布棒、煤氣燈或酒精燈、加入了抗生素的新LB平板。

【操作步驟】

二、斜面固體培養(yǎng)

【材料】

1．菌 長(zhǎng)有細(xì)菌的平板、甘油凍存管、轉(zhuǎn)化完畢的感受態(tài)細(xì)胞等。

2．物品 接種環(huán)、煤氣燈或酒精燈、新的斜面培養(yǎng)基

【操作步驟】

三、半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)

【材料】

1．菌液

2．物品 接種針、煤氣燈或酒精燈、新的半固體培養(yǎng)基、試管架。

【操作步驟】

四、液體培養(yǎng)基培養(yǎng)

（一）小量液體培養(yǎng)

【材料】

1．菌 長(zhǎng)有細(xì)菌的平板、甘油凍存管、轉(zhuǎn)化完畢的感受態(tài)細(xì)胞等。

2．物品 接種針或小木棒、煤氣燈或酒精燈、2ml LB液體培養(yǎng)基、搖床。

【操作步驟】

1．用接種針接種

（二）大量液體培養(yǎng)

【材料】

1．少量初始菌

2．物品 煤氣燈或酒精燈、800ml LB液體培養(yǎng)基、搖床。

【操作步驟】

【注意事項(xiàng)】

1．接種環(huán)（針）使用前后都得灼燒滅菌，滅菌后須冷卻片刻方可取菌接種。

2．在離酒精燈或煤氣燈較近區(qū)域內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌操作。因?yàn)槊簹鉄舢a(chǎn)生上升氣流，能防止空氣中飄落下來(lái)的細(xì)菌所帶來(lái)的污染。使用煤氣燈或酒精燈時(shí)應(yīng)注意防火。

3．在開蓋前或開蓋后用煤氣燈或酒精燈灼燒試管口、三角瓶的瓶口2～3次。

4．開蓋的試管或三角瓶的瓶口不能垂直向上，而應(yīng)傾斜，以防止飄落下來(lái)的雜菌污染。

5．平皿是倒置保存的，在保存過(guò)程中蓋子內(nèi)側(cè)可能有凝結(jié)的水珠，使用平皿時(shí)，應(yīng)盡可能去掉這些凝結(jié)在蓋上的水珠，以減少污染。此外，不要混淆不同平皿的蓋子。

五、生長(zhǎng)曲線與菌數(shù)測(cè)定

菌落特征：乳白色，圓形，菌落邊緣整齊，表面光滑，表面和背面顏色一致。

培養(yǎng)基中細(xì)菌的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程一般可分為遲緩期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、穩(wěn)定期和衰亡期（圖3-6）。這是根據(jù)培養(yǎng)時(shí)間的不同，細(xì)菌所經(jīng)歷的4個(gè)系列生理狀態(tài)而分的。每一個(gè)生理狀態(tài)的生長(zhǎng)有賴于前一個(gè)生理狀態(tài)的發(fā)育史。

圖3-6 細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線

液體培養(yǎng)基中細(xì)菌的菌量可采用分光光度計(jì)來(lái)測(cè)定。測(cè)定波長(zhǎng)為600nm，分別取細(xì)菌培養(yǎng)液與未接菌的液體培養(yǎng)基，加入比色杯中，以未接菌的液體培養(yǎng)基調(diào)零，測(cè)定菌液的吸光度值（A600）。

結(jié)果分析：A600=0.2～1.0時(shí)，細(xì)菌在指數(shù)生長(zhǎng)期；A600＞1.0，細(xì)菌處于平臺(tái)期；A600=1.0時(shí)，細(xì)菌數(shù)約為108個(gè)/ml。