【目的】正確掌握不規(guī)則抗體篩查方法。

【方法】微柱凝膠法。

【標(biāo)本】新鮮全血(EDTA-K 2抗凝)。

【試劑】廣譜微柱凝膠抗球蛋白卡、市售篩檢細(xì)胞。

【器材】試管、滴管、加樣槍、普通離心機(jī)、血型血清學(xué)專用離心機(jī)、37℃水浴箱。

【操作步驟】

1.操作前準(zhǔn)備:戴口罩、帽子、手套,穿工作服,準(zhǔn)備并清點(diǎn)本試驗(yàn)所需器材。

2.受血者新鮮全血(EDTA-K 2抗凝)3ml在1000g條件下離心5min,離心后血漿無溶血、乳糜,然后分離血漿備用。

3.將篩檢細(xì)胞配成0.8%～1%紅細(xì)胞鹽水懸液。

4.取廣譜抗人球蛋白卡(抗IgG+C3 d)一張,每份待檢樣本標(biāo)記3孔,分別標(biāo)記為“Ⅰ”、“Ⅱ”和“Ⅲ”。

5.每孔按照標(biāo)記加入相應(yīng)的0.8%～1%篩檢細(xì)胞懸液各50μl。

6.向標(biāo)記的每孔中分別加入受血者血漿25μl。

7.將微柱凝膠卡垂直橫向豎立在臺(tái)面上,輕叩卡的左右邊緣混勻加樣槽中的血漿與紅細(xì)胞,混勻后置于37℃水浴箱中孵育15min。

8.取出后置于血型血清學(xué)專用離心機(jī)離心5min。

9.離心結(jié)束后,取出,觀察判定結(jié)果并記錄。

10.判定標(biāo)準(zhǔn)。

(1)陽性結(jié)果:紅細(xì)胞浮在凝膠表面或膠中。

(2)陰性結(jié)果:紅細(xì)胞沉積于微柱凝膠孔的底部。

(3)溶血反應(yīng):微柱凝膠管中液體出現(xiàn)清澈透明紅色,表示發(fā)生溶血(排除機(jī)械、人為操作錯(cuò)誤等原因),視為陽性結(jié)果。

(4)其他:陽性結(jié)果需要進(jìn)一步檢測(cè)抗體特異性。

11.操作后正確處理醫(yī)療垃圾,實(shí)驗(yàn)器材歸回原位。

【注意事項(xiàng)】

1.試驗(yàn)前應(yīng)將新卡離心,以免微粒內(nèi)容物交叉污染。

2.若凝膠卡封口開裂、孔中凝膠干涸或有氣泡時(shí),不可使用。

3.撕開凝膠卡封口膜時(shí),動(dòng)作應(yīng)輕柔不能用力過猛。

4.紅細(xì)胞懸液的濃度為0.8%～1%,濃度過高或過低會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

5.血漿標(biāo)本必須充分離心去除纖維蛋白,否則會(huì)在微柱凝膠卡中阻止紅細(xì)胞沉淀,呈現(xiàn)假陽性反應(yīng)。

6.溶血、脂血、細(xì)菌污染的標(biāo)本會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

【技能要點(diǎn)】

1.嚴(yán)格遵守操作規(guī)范。

2.結(jié)果判讀正確。

(邵智利　陳　靜)