1.細(xì)胞間轉(zhuǎn)運(yùn)

(1)研究藥物吸收機(jī)制(被動轉(zhuǎn)運(yùn)或主動轉(zhuǎn)運(yùn))藥物吸收的飽和性是主動轉(zhuǎn)運(yùn)或促進(jìn)擴(kuò)散的特征，而吸收存在方向性是藥物受外排蛋白作用的特征。因此，不具備飽和性和方向性兩大特征的藥物吸收可能是被動轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。研究的實(shí)驗(yàn)方法有BBMV、Ussing Chamber系統(tǒng)、翻轉(zhuǎn)腸囊法及Caco-2細(xì)胞法等。

(2)研究藥物被動轉(zhuǎn)運(yùn)發(fā)生的途徑(細(xì)胞間或細(xì)胞內(nèi))當(dāng)膜內(nèi)外存在滲透壓差或靜水壓時(shí)，細(xì)胞間的水分子發(fā)生移動，從而可牽引尿素等水溶性小分子隨水分子運(yùn)動，這種現(xiàn)象稱為溶劑牽引。細(xì)胞間轉(zhuǎn)運(yùn)存在典型的溶劑牽引現(xiàn)象，通過改變灌流液的滲透壓考察藥物滲透系數(shù)的變化。此外，還可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)運(yùn)標(biāo)示物比較的方法進(jìn)一步考察藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)途徑。甘露醇和睪酮分別是細(xì)胞間轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的標(biāo)示物，EDTA則是已知的能夠打開細(xì)胞間緊密連接、增加細(xì)胞間滲透的調(diào)節(jié)劑。例如，研究者用EDTA溶液加至Caco-2細(xì)胞單層頂側(cè)，考察米替福新、甘露醇和睪酮的表觀滲透系數(shù)，結(jié)果甘露醇的表觀滲透系數(shù)提高了近30倍，睪酮沒有顯著變化，米替福新提高了3倍，可見米替福新的轉(zhuǎn)運(yùn)至少有部分通過細(xì)胞間途徑轉(zhuǎn)運(yùn)。

2.藥物外排轉(zhuǎn)運(yùn)器

P-gp、MRP和BCRP是藥物外排轉(zhuǎn)運(yùn)器研究的主要對象。FDA于2004年開始要求考察新的分子實(shí)體是否是P-gp相互作用的底物或抑制劑。體外細(xì)胞模型法研究藥物與P-gp底物相互作用的考察方法和標(biāo)準(zhǔn)主要有3種:①比較藥物在細(xì)胞不同側(cè)的滲透性，標(biāo)準(zhǔn)為基底側(cè)到頂側(cè)的滲透性與頂側(cè)到基底側(cè)的滲透性比值大于2;②研究藥物對P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)器ATP酶的刺激作用，標(biāo)準(zhǔn)為ATP的活性與空白相比大于2;③鈣黃綠素的抑制實(shí)驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)為熒光強(qiáng)度大于GF120918(P-gp底物)反應(yīng)的10%。以上內(nèi)容也可作為其他外排轉(zhuǎn)運(yùn)器研究的參考。

在實(shí)驗(yàn)中加入P-gp抑制劑是確定藥物是否是其底物的常用方法。P-gp抑制劑分為三代:第一代本身有藥理活性，又具有P-gp抑制作用的物質(zhì)，如維拉帕米、環(huán)孢素A、利血平等;第二代為無藥理活性，具有較高P-gp親和力的分子，但同時(shí)可能抑制兩個(gè)或多個(gè)ABC外排準(zhǔn)運(yùn)蛋白，如GF120918、維拉帕米D型異構(gòu)體等;第三代具有高度專一的抑制作用，如LY335979、XR9576等。

采用基因修飾型小鼠進(jìn)行各種體內(nèi)外研究是藥物和P-gp之間相互作用的最直接實(shí)驗(yàn)方法。

3.藥物內(nèi)流轉(zhuǎn)運(yùn)器

肽類轉(zhuǎn)運(yùn)器是研究最為充分的小腸內(nèi)流轉(zhuǎn)運(yùn)器。應(yīng)用細(xì)胞模型，以電化學(xué)質(zhì)子梯度作為推動力，隨著質(zhì)子從細(xì)胞內(nèi)流向細(xì)胞外，轉(zhuǎn)運(yùn)器活化開始把物質(zhì)從細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)，通過親和常數(shù)的計(jì)算評價(jià)藥物和轉(zhuǎn)運(yùn)器相互作用的強(qiáng)弱。

4.膜動轉(zhuǎn)運(yùn)

細(xì)胞膜主動變形將某些物質(zhì)攝入細(xì)胞內(nèi)或從細(xì)胞內(nèi)釋放到細(xì)胞外的過程，包括入胞作用和出胞作用。研究腸細(xì)胞膜內(nèi)吞方法中，主要有形態(tài)學(xué)方法、生物化學(xué)方法或分子生物學(xué)方法。形態(tài)學(xué)方法利用電鏡和光鏡直觀地觀察配體和細(xì)胞膜上受體結(jié)合并被吞入細(xì)胞，以及在細(xì)胞中移動的整個(gè)過程;生物化學(xué)方法則通過分析膜泡成分研究內(nèi)吞的過程。

5.淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)

淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)的實(shí)驗(yàn)研究主要是各種動物模型的淋巴插管技術(shù)。