痰液采取方法和質(zhì)量直接影響痰檢查的陽性率，痰脫落細胞檢查結(jié)果與下面四個步驟有關(guān)：咳痰、涂片、染色、鏡檢。

（一）痰液留取的兩個重要環(huán)節(jié)

1．痰液必須從肺部深處用力咳出。

2．標本要新鮮（不超過1～2?h），否則影響檢查結(jié)果，首先向病人及家屬講明留痰的意義。

（1）合格痰液

①病人在門診坐候30?min，用力從肺部深處咳出。

②若病人無咳嗽，可吸一口煙激發(fā)咳嗽。

③咳嗽聲音低沉，咳出的痰液黏稠，可拉成細絲。

④5～6口痰液（3～5?ml）。

⑤吐在浸蠟盒內(nèi)或塑料杯內(nèi)。

⑥立即涂片。

（2）不合格痰液

①咳嗽聲音短而響亮。

②咳出痰液呈水樣、鼻涕樣。

③咳在紙上的痰。

④陳舊痰。

（二）痰液外觀

是直接觀察痰液留取質(zhì)量的標準，也是診斷肺癌的重要依據(jù)。因此，如何精選有效部分進行涂片是提高痰癌細胞檢出率的第二個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

1．血絲痰　血絲痰常混在黏稠痰液中，提示因癌腫表面遭受損傷和壞死潰瘍引起血管破裂所致，選擇此部分涂片，診斷陽性率較高，為62.7%。

2．白色痰液　粗細如白色細線，呈螺旋狀卷曲，牽引時可拉長，放后又縮短，此痰液診斷陽性率較高，為23.1%。

3．透明蛋清液　無色似蛋清，高度黏稠，可拉成細絲，診斷陽性率也較高，為11.6%。

4．粉色、咖啡色痰　表示紅細胞溶解陳舊所致，診斷陽性率僅為1.95%。

5．泡沫痰液　痰液表面有大量泡沫，多伴有肺氣腫、氣管炎，應(yīng)取泡沫下面的黏液部分檢查，陽性率為0.9%。

6．鮮血痰液　提示良性癌變，多見于肺不張、肺結(jié)核、凝血機制障礙等，無一例陽性。

7．黃色膿痰　黃色或綠色膿樣，由大量膿細胞、炎性細胞組成，提示化膿性炎癥，無一例能查到癌細胞。

8．灰黑色凍痰　有大量吞噬灰塵的吞噬細胞——塵埃細胞。此時應(yīng)重留。

9．水樣痰　混入大量口水、涎液、鼻涕或痰存留時間長，液化，無一例陽性，應(yīng)重新留取。

從以上可知，痰液的留取或精選有效痰液是痰脫落細胞檢驗診斷的關(guān)鍵。

（三）涂片

1．挑選陽性外觀痰液，用竹簽挑取有效部分放于3張玻璃片上，每張大約1?ml。

2．將痰液無效部分或多余痰液刮去，剩痰液0.2?ml左右，用竹簽均勻慢慢像拉網(wǎng)似地涂抹，面積大小1.2?cm×3?cm，痰層厚1～2?mm。涂抹太厚細胞重疊，影響觀察，涂抹太薄細胞過少，影響陽性率。

較薄涂片適合用瑞-姬雙染色。

較厚涂片適合用HE染色。

3．痰脫落細胞檢查，由于標本黏稠、厚，最好用HE染色。

（四）染色

1．遵循三項原則

（1）對標本黏稠、較厚的涂片，具有較強染色能力。

（2）染色新鮮，細胞結(jié)構(gòu)清晰，癌細胞與非癌細胞經(jīng)染色后，顏色有明顯差異。

（3）方法簡單、快速、易掌握，便于推廣。

我們根據(jù)這三項原則，選擇用HE染色。

2．HE染色的優(yōu)點（改良快速）

（1）涂片較厚不干，可濕固定。

（2）對黏稠涂片，穿透力強，染色滿意，診斷陽性率高；避免用瑞氏染色對較強嗜堿性細胞、癌細胞群染色不清，呈一片黑的?缺點。

（3）HE染色對鑒別癌細胞種類有幫助，如鱗癌偏酸性，腺癌嗜堿性，對未分化癌較瑞氏染色易鑒別。

（4）涂片厚，診斷陽性率高。

我們主張用改良HE染色代替瑞氏染色。

3．方法

（1）新鮮涂片用95%乙醇與乙醚等量混合，含少許冰醋酸固定液固定5～8?min。

（2）晾干或烘干，水洗（缸內(nèi)）。

（3）烘干，蘇木素染色7?min。

（4）取出，在1%鹽酸乙醇缸內(nèi)浸泡1～3次。

（5）晾干或烘干，用1%伊紅染色1?min。

（6）在95%乙醇缸內(nèi)浸泡數(shù)秒。

（7）晾干或烘干，鏡檢。

（五）檢查

將涂片先在低倍鏡下查找陽性背景或可疑細胞成分，再用油鏡仔細觀察其特點。

1．HE染色觀察細胞要抓住核的三大特點　①核增大；②核有畸形、角度；③核濃染（黑墨水似的）。

2．全顯染色（瑞氏-姬姆薩混合）要抓住八個特點　①細胞大小不等；②形態(tài)畸形怪異；③成團、成群相互擁擠重合，邊緣不清；④核增大＞20μm，有畸形；⑤染色質(zhì)濃密不均；⑥核分裂增多，異常核分裂；⑦核仁增大，增多；⑧胞漿少，偏堿性，有空泡。