(一)腎上腺素和去甲腎上腺素測定

1.HPLC-電化學(xué)法

參考區(qū)間:腎上腺素109~437pmol/L;去甲腎上腺素0.615~3.24nmol/L。

2.熒光法 包括乙二胺法和三羥吲哚法。

(1)乙二胺法:血漿中的腎上腺素和去甲腎上腺素經(jīng)氧化鋁吸附、陽離子交換樹脂分離純化,在稀酸中,腎上腺素氧化成腎上腺素紅,后者與1分子乙二胺縮合,經(jīng)脫水、脫氫生成熒光物質(zhì)。去甲腎上腺素可與2分子乙二胺反應(yīng),生成熒光物質(zhì)。

腎上腺素和去甲腎上腺素的反應(yīng)產(chǎn)物均具有高于其母體的熒光強(qiáng)度。在最大激發(fā)波長(420nm)下,去甲腎上腺素在510nm的熒光強(qiáng)度比腎上腺素大1倍,而在580nm處腎上腺素的熒光強(qiáng)度比去甲腎上腺素大。在同一激發(fā)光波長作用下,兩種物質(zhì)具有不同的熒光波長和強(qiáng)度,與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品比較,計(jì)算血漿中腎上腺素和去甲腎上腺素的含量。

(2)三羥吲哚法:用酸性氧化鋁分離、提純血漿中腎上腺素和去甲腎上腺素,在p H 6.0或p H 3.5條件下,用鐵氰化鉀使它們氧化成具有熒光的三羥吲哚,以熒光法測定其含量。在p H 6.0時(shí),兩者均被氧化,測出兩者的總量。在p H 3.5時(shí),腎上腺素被完全氧化,去甲腎上腺素僅少量被氧化,測出的是腎上腺素含量。去甲腎上腺素=總量-腎上腺素。

參考區(qū)間:腎上腺素,1.15mmol/L±0.16mmol/L;去甲腎上腺素,1.71mmol/L± 0.18mmol/L

臨床意義:嗜鉻細(xì)胞瘤時(shí),兩者均明顯增高。如腎上腺素顯著高于去甲腎上腺素,提示可能為腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞瘤。原發(fā)性高血壓、甲狀腺功能減退、交感神經(jīng)母細(xì)胞瘤等也可增高。降低見于甲狀腺功能亢進(jìn)、艾迪生病等。

(二)尿兒茶酚胺測定(離子交換色譜法)

【原理】 將尿液去蛋白,經(jīng)陽離子交換樹脂處理,在p H6.5條件下,游離型兒茶酚胺可選擇性吸附于色譜柱上,改變條件洗脫后,經(jīng)電化學(xué)檢測器測定,與標(biāo)準(zhǔn)品(二羥苯胺)比較,根據(jù)洗脫峰保留時(shí)間和峰高的不同,對兒茶酚胺進(jìn)行定性或定量分析。

【參考區(qū)間】 腎上腺素:2.7~108.7nmol/24h尿;去甲腎上腺素:82.4~470.6nmol/24h尿;多巴胺:420~2600nmol/24h尿。

【質(zhì)量保證】 兒茶酚胺測定標(biāo)本是血漿(血清)或尿液。在情緒穩(wěn)定和安靜狀態(tài)下靜脈采血。收集24h尿應(yīng)及時(shí)檢查或加防腐劑置冰箱暫時(shí)保存。試驗(yàn)前2d應(yīng)限制飲茶、咖啡等興奮性飲料。利用HPLC法測定尿液游離型兒茶酚胺。

(三)尿香草扁桃酸測定(Pisano法)

香草扁桃酸(VMA)是兒茶酚胺的主要代謝產(chǎn)物,尿VMA測定是內(nèi)分泌檢查的常規(guī)項(xiàng)目,因標(biāo)本來源方便,一般實(shí)驗(yàn)室均可開展,有分光光度法和HPLC法。由于HPLC操作繁雜,臨床多采用分光光度法。

【原理】 將尿液酸化,用乙酸乙酯抽提以VMA為主的酚、酸類化合物,加K2 CO3分離乙酸乙酯抽提液中的VMA,加入NaIO4,使VMA氧化成香草醛,甲苯抽提后,在360nm處測定其吸光度,與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)管比較,求出VMA含量。也可用重氮化對硝基苯胺顯色法進(jìn)行測定。

【參考區(qū)間】 10~35μmol/24h尿(2~7mg/24h尿)。

【質(zhì)量保證】 VMA分泌具有晝夜節(jié)律性,應(yīng)收集24h尿液,置4℃冰箱或冰凍保存,加入6mol/L鹽酸10ml防腐。本法易受食物及某些藥物的干擾,如巧克力、咖啡、茶、香蕉、檸檬、多種擬腎上腺素和含多巴胺成分的藥品等均可導(dǎo)致假陽性,芬氟拉明可致假陰性。測定前應(yīng)對上述飲食和藥物加以限制。本法操作步驟多,需嚴(yán)格遵守操作程序。

【臨床意義】 尿兒茶酚胺和VMA測定可了解體內(nèi)兒茶酚胺的水平。主要用于嗜鉻細(xì)胞瘤的診斷和高血壓的鑒別診斷。增高見于嗜鉻細(xì)胞瘤、交感神經(jīng)母細(xì)胞瘤、原發(fā)性高血壓、甲狀腺功能減退等;降低見于甲狀腺功能亢進(jìn)、原發(fā)性慢性腎上腺皮質(zhì)功能減退等。