【原理】　血漿游離血紅蛋白檢測較常用的方法是色原比色定量法。游離血紅蛋白在酸性條件下具有過氧化物酶樣作用，能使無色的鄰甲苯胺氧化為穩(wěn)定的有色物質(zhì)。其顏色的深淺與血紅蛋白的含量呈正比，可借助分光光度計測定其吸光度，用已知濃度的血紅蛋白溶液為標(biāo)準(zhǔn)進行計算，得出被測血漿血紅蛋白濃度。

【試劑】

1.1%鄰-甲聯(lián)苯胺。

2.新鮮配制的1%過氧化氫。

3.10%冰醋酸溶液。

4.100mg/L血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液制備取抗凝靜脈血，離心去除血漿，用生理鹽水洗滌紅細胞3次，以壓積紅細胞的體積為準(zhǔn)，加入等體積的蒸餾水和1/2體積的四氯化碳或氯仿，猛烈振搖5～10min，2 500r/min離心20min，將血紅蛋白液分離出來，以氰化高鐵血紅蛋白法測定其濃度，并用生理鹽水調(diào)節(jié)至100g/L。此為儲存標(biāo)準(zhǔn)液，低溫冰箱保存。用時稀釋成100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。

【操作方法】

1.取3只試管，按表7-4加入各種試劑。

表7-4　血漿游離血紅蛋白測定操作方法

2.室溫放置10min后，波長515nm，以空白管調(diào)零點，測定各管光密度。

3.計算 血漿游離血紅蛋白（mg/L）＝測定管光密度/標(biāo)準(zhǔn)管光密度×100

【參考值】　正常＜40mg/L。

【臨床意義】　正常人血漿中僅含微量游離血紅蛋白，且大部分與Hp結(jié)合為Hp-Hb復(fù)合物。血漿游離血紅蛋白濃度增加是血管內(nèi)溶血的特征，特別高的游離血紅蛋白值，如高達10g/L僅見于嚴(yán)重的血管內(nèi)溶血。在大多數(shù)遺傳性溶血性貧血的病人是正常的（包括遺傳性球形紅細胞增多癥），如果是100～600mg/L的輕度增加，見于鐮形細胞貧血和輕型地中海貧血。嚴(yán)重的獲得性的免疫性溶血，其值可達1g/L。如血漿游離血紅蛋白＞500mg/L，血漿出現(xiàn)肉眼可見的淡紅色。如血漿游離血紅蛋白＞lg/L，可直接用氰化高鐵血紅蛋白法測定。

【注意事項】　采血和分離血漿過程中，應(yīng)嚴(yán)格防止發(fā)生體外溶血，以免造成假陽性。試驗用的吸管、試管等器材，用前必須用鹽酸浸泡24h，流水沖洗后用蒸餾水洗3次，以避免血紅蛋白污染而造成假陽性。過氧化氫溶液的濃度要準(zhǔn)確，應(yīng)新鮮配制。