第二節(jié)　蠕蟲標(biāo)本的采集、保存和觀察方法

一、吸蟲的采集保存

（一）采集

在各臟器中或其沖洗物沉淀中，如發(fā)現(xiàn)吸蟲時(shí)，應(yīng)以彎頭解剖針或毛筆將蟲體挑出（注意！不應(yīng)采用鑷子夾取，否則鑷子夾住的部位，會(huì)使蟲體損壞變形，影響以后的觀察）。挑出的蟲體，體表常附有糞渣、黏膜等污物，應(yīng)先放入1%的鹽水溶液中。較小的蟲體，可和鹽水放入小試管中，加塞塞緊，充分振蕩將污物除去洗凈。較大的蟲體可用毛筆刷洗。有些蟲體的腸管內(nèi)含有大量的食物，可在生理鹽水中放置過夜，等其食物消化或排出。

（二）固定法

標(biāo)本洗凈后，較小的蟲體，可先在薄荷腦溶液中使蟲體松弛。薄荷腦溶液的配制是取薄荷腦（Mentho1）24g，溶于100ml95%的酒精中，為薄荷腦飽和酒精溶液，使用時(shí)將此液一滴，加入100ml水中即可。

在上液中松弛的蟲體，即可投入下述固定液中固定。較大較厚的蟲體標(biāo)本，為了以后制作壓片標(biāo)本的方便，可將蟲體先壓入兩載玻片間，為了不使蟲體壓得過薄可在玻片兩端墊以適當(dāng)厚度的紙片，爾后以橡皮筋扎緊玻片兩端。

固定吸蟲時(shí)常用的固定液有如下幾種。

1.勞氏（Looss）固定液　適用于小型吸蟲。取飽和升汞溶液（約含升汞7%）100ml，加冰醋酸2ml，混合即成。固定蟲體時(shí)，將蟲體放于一小試管中，加入鹽水，達(dá)試管的1/2處，充分搖洗，再加入勞氏固定液搖勻，12h后，將蟲體取出移入加有0.5%碘的70%的酒精中，并更換溶液數(shù)次，直到碘酒精溶液不再褪色為止，再將蟲體移到70%酒精溶液中保存，若欲長期保存應(yīng)在酒精中加5%甘油。

2.酒精－福爾馬林－醋酸固定液（A.F.A固定液）　本液以95%酒精50份，福爾馬林（實(shí)含甲醛40%）10份，醋酸2份，水40份混合而成。大型的已夾于玻片間的蟲體，可浸入此固定液中過夜。小的蟲體可先放于充滿2/3生理鹽水的小瓶內(nèi)，用力搖振，待蟲體疲倦而伸展時(shí)，再將鹽水傾去1/2，再加入本固定液，放置過夜。次日將蟲體取出，保存于加有5%甘油的70%酒精中。

3.福爾馬林固定液　取福爾馬林1份與水9份混合即得。將小型吸蟲蟲體或夾于玻片間的蟲體投入固定液中，經(jīng)24h即固定完畢。較大的夾于兩玻片間的吸蟲，固定液滲入較難，可在固定數(shù)小時(shí)后，將兩玻片分開，這時(shí)蟲體將貼附于一玻片上，將附有蟲體的玻片繼續(xù)投入固定液中過夜。最后將蟲體置3%～5%的福爾馬林溶液中保存。

經(jīng)以上三種方法中任何一種固定的標(biāo)本，在保存時(shí)均應(yīng)給以標(biāo)簽。標(biāo)簽應(yīng)用較硬的紙片（如道林紙）用鉛筆書寫，內(nèi)容應(yīng)包括標(biāo)本編號(hào)、采集地點(diǎn)、宿主及其產(chǎn)地、寄生部位、蟲名、保存液種類和采集時(shí)間，將以上內(nèi)容一式兩份書寫，一份與蟲體一同放于瓶內(nèi)，一份貼于瓶外。

在采集標(biāo)本時(shí)，尚應(yīng)有登記本，將標(biāo)本采集時(shí)的有關(guān)情況，按標(biāo)本編號(hào)，記于登記本上。對蟲體所引起的宿主的病理變化也應(yīng)做詳細(xì)的記載。

（三）裝片標(biāo)本制法

吸蟲標(biāo)本的形態(tài)觀察，常需制成染色裝片標(biāo)本或切片標(biāo)本。切片標(biāo)本的制作與組織切片相同。整體裝片標(biāo)本的制法有以下數(shù)種。

1.蘇木素法　常用的為德氏（Delafield）蘇木素染液。其配法如下：先將蘇木素4g溶于95%酒精25ml中，再向其中加入400ml的飽和銨明礬（Ammonium Alum）溶液（約含銨明礬11%）。將此混合液曝曬于日光及空氣中3～7d（或更長時(shí)間），待其充分氧化成熟，再加入甘油100ml和甲醇100ml保存，待其顏色充分變暗后，濾紙過濾，裝于密閉的瓶中備用。染色時(shí)步驟如下。

（1）將保存于福爾馬林中的蟲體，取出以流水沖洗。如蟲體原保存于70%酒精中，則先后將蟲體移經(jīng)50%和30%酒精中各1h，再移入蒸餾水中。

（2）將德氏蘇木素染液加蒸餾水10～15倍，使呈濃葡萄酒色。將以上蟲體移入此稀釋的染液內(nèi)，染色過夜。

（3）取出染色后的蟲體，在蒸餾水中除去多余的染液，再依次通過30%，50%，70%酒精各0.5～1h。

（4）蟲體移入酸酒精中褪色（酸酒精是在80%酒精100ml中加入鹽酸2ml），待蟲體變成淡紅色。

（5）再將蟲體移回80%酒精中，再循序通過90%，95%和l00%酒精中各0.5～1h。

（6）將蟲體由100%的酒精中移入二甲苯或水楊酸甲酯（亦稱冬綠油或冬青油）中，透明0.5～lh。

（7）將透明的蟲體放于載玻片上，滴一滴加拿大樹膠，加蓋玻片封固，待干，即成。

2.卡紅染色法　以卡紅為原料，常用的染色液有鹽酸卡紅和硼砂卡紅等。

鹽酸卡紅的配制是以蒸餾水15ml加鹽酸2ml，煮沸，趁熱加入卡紅染粉4g，再加入85%的酒精95ml，再滴加濃氨水以中和，等出現(xiàn)沉淀，放涼，過濾，濾液即為鹽酸卡紅染液。

硼砂卡紅是以4%硼砂（Na₂B₄O₇）溶液100ml，加入卡紅染粉1g，加熱使其溶解，再加入70%酒精100ml，過濾，濾液即為硼砂卡紅染液。

染色方法如下。

（1）原保存于70%酒精內(nèi)的標(biāo)本，可直接取出投入染色液中染色。保存于福爾馬林液內(nèi)的蟲體標(biāo)本，應(yīng)先取出水洗1～2h，爾后循序通過30%，50%，70%的酒精各0.5～lh，再投入染液中，在染液中過夜使蟲體染成深紅色。

（2）自染液中取出蟲體，放入酸酒精中褪色，（酸酒精是以70%酒精100ml加濃鹽酸2m1），使顏色深淺分明，即蟲體外層呈淡紅色，內(nèi)部構(gòu)造呈深紅色。

（3）蟲體移入80%、95%和純酒精中各0.5～1h。

（4）移入二甲苯或水楊酸甲酯中透明。

（5）已透明的蟲體，移置載玻片上，加一滴加拿大樹膠，加蓋玻片封固。

二、絳蟲的采集保存

1.采集　絳蟲大部分寄生于腸管中，并以頭節(jié)牢固地附著于腸壁上。采集標(biāo)本時(shí)，為了保證蟲體的完整，切勿用力猛拉，而應(yīng)將附著有蟲體的腸段剪下，連同蟲體浸入水中，5～6h后，蟲體會(huì)自行脫落，體節(jié)也自行伸直。

2.固定　將收集到的蟲體，浸入勞氏固定液、70%酒精或5%福爾馬林液中固定。準(zhǔn)備做瓶裝陳列的標(biāo)本，以福爾馬林溶液固定較好。如欲制成染色裝片標(biāo)本以觀察其內(nèi)部結(jié)構(gòu)，則以勞氏固定液或酒精固定為好。

絳蟲有時(shí)很長（可達(dá)數(shù)米），易于斷裂而又易于相互纏結(jié)，故固定時(shí)應(yīng)注意。不太長的蟲體，可提住蟲體后端，將蟲體懸空伸長，爾后將蟲體下放，逐步地浸入固定液內(nèi)。過長的蟲體，可先繞于一玻璃瓶上，連瓶浸入固定液內(nèi)。亦可在大燒杯中，先放入以固定液浸潤的濾紙一張，提取蟲體后端，使蟲體由頭節(jié)始，逐步放落在濾紙上，加蓋一層濕濾紙；再以同樣操作，放上第2條蟲體；如是操作，全部放好所有蟲體，最后將固定液輕輕注滿燒杯內(nèi)，固定24h后取出。

保存于瓶內(nèi)的標(biāo)本應(yīng)登記并加標(biāo)簽，其注意事項(xiàng)同吸蟲。

3.絳蟲制片法　絳蟲蟲體較長，因此，制片時(shí)要切斷蟲體，根據(jù)觀察的需要，采取一定部位的節(jié)片，染色后做成裝片標(biāo)本。絳蟲的頭節(jié)是決定絳蟲種類的重要依據(jù)之一，應(yīng)選為裝片標(biāo)本的材料；此外，成熟節(jié)片和孕卵節(jié)片，亦常各切取3～5節(jié)，制成染色裝片標(biāo)本。其染色和裝片方法與吸蟲同，可參閱吸蟲的有關(guān)資料。

三、線蟲的采集保存

1.采集　在剖檢家畜時(shí)，按上節(jié)尋找蟲體的方法，發(fā)現(xiàn)蟲體后，以彎頭解剖針或毛筆將蟲體挑出，移入生理鹽水中，洗凈；寄生于肺部的線蟲和絲蟲目的線蟲，在略為洗凈后即應(yīng)盡快地放于固定液中固定，否則蟲體易于破裂。

線蟲雌雄異體，雌蟲一般較雄蟲大，在蟲體鑒定時(shí)，常需依雄蟲的某些形態(tài)特征作為依據(jù)，因此，采集蟲體時(shí)不可忽視較小蟲體的采集。一些有較大口囊的線蟲（如圓線蟲、夏伯特線蟲、鉤口線蟲等）和有發(fā)達(dá)交合傘的線蟲，其口囊或交合傘中，常包含有大量雜質(zhì)，妨礙以后的觀察，應(yīng)在固定前用毛筆洗去，或充分振蕩以洗去，爾后固定。

2.固定　可采用酒精或福爾馬林固定。用酒精固定時(shí)，系用70%酒精，加熱到70℃左右（在火焰上加熱時(shí)，酒精中有小氣泡升起時(shí)即約為70℃），將洗凈的蟲體移入，蟲體即在熱固定液中伸直而固定，待酒精冷后，將蟲體移入含5%甘油的80%酒精中，加標(biāo)簽保存。標(biāo)簽的書寫內(nèi)容與吸蟲同。

福爾馬林固定液是福爾馬林3ml加到生理鹽水100ml中。固定蟲體時(shí)也應(yīng)先將固定液加熱到70℃，再投入蟲體。固定后標(biāo)本即保存于固定液內(nèi)，也可以移入含5%甘油的80%酒精中，加標(biāo)簽保存。

（1）線蟲的觀察與制片：線蟲經(jīng)固定后，是不透明的，欲進(jìn)行線蟲形態(tài)的觀察，必先進(jìn)行透明或裝片。為了能從不同的側(cè)面對蟲體形態(tài)進(jìn)行觀察，以不做固定裝片為好，這樣可以在載玻片上將蟲體翻動(dòng)，觀察得更仔細(xì)。

（2）蟲體的透明方法，常用的有以下各種。

①甘油透明法：將保存于含5%甘油的80%酒精中的蟲體，連同保存液傾入蒸發(fā)皿中，置溫箱中，并不斷滴加少量甘油，直到酒精蒸發(fā)殆盡，此時(shí)留于殘存甘油中的蟲體即已透明，可供檢查。

如欲在短時(shí)間內(nèi)完成這一透明過程，可將蒸發(fā)皿放于一加有熱水的燒杯上，以酒精燈加熱，促使蒸發(fā)皿中的酒精在短時(shí)間內(nèi)揮發(fā)，而達(dá)到蟲體透明的目的。

此法透明后的標(biāo)本，即可保存于甘油內(nèi)。

②乳酚（Lacto－pheno1）法：乳酚系由甘油2份，乳酸1份，石炭酸1份和蒸餾水1份混合而成，是一種良好的透明液。蟲體自保存液中取出后，應(yīng)先移入乳酚液與水的等量混合液中，半小時(shí)后再移入乳酚液中，數(shù)分鐘后，蟲體即透明，可供檢查。檢查后蟲體應(yīng)自透明液中取出，移回原保存液中保存。

③石炭酸透明法：蟲體自保存液中取出，放于純石炭酸溶液中（石炭酸原為針狀結(jié)晶，純?nèi)芤褐负?0%的溶液），蟲體很快即透明。若透明過度，可于檢查時(shí)，在蓋玻片邊緣處（蓋玻片下是浸在石炭酸中的蟲體）滴加無水酒精一滴，此法透明快。透明液對人有腐蝕性，對蟲體也有損害，故觀察后應(yīng)立即將蟲體移回原保存液中，并在短期內(nèi)更換保存液3次，以除去殘留的石炭酸，否則蟲體將變?yōu)樽睾稚?/p>

有時(shí)為了某種需要，亦可將線蟲制成裝片標(biāo)本。制作時(shí)蟲體不染色，直接循序通過70%，80%，90%，100%的酒精各0.5h脫水，最后在水楊酸甲酯或二甲苯中透明，透明后移載玻片上，滴加拿大樹膠，撥正所需位置，加蓋玻片封固。

如在蟲體脫水前，按吸蟲制片的方法，將蟲體先以蘇木素或卡紅染色，爾后制成裝片標(biāo)本，則效果更好。

四、蠕蟲卵的采集保存

1.蟲卵材料的采集

（1）自患畜糞便中收集蟲卵：可參照蠕蟲卵的各種集卵法。自家畜糞便中收集蟲卵的缺點(diǎn)在于多數(shù)家畜體內(nèi)常有多種寄生蟲同時(shí)寄生，不易獲得單一種的蟲卵。

（2）生理鹽水收集蟲卵：將解剖家畜時(shí)所采集的每種寄生蟲挑入生理鹽水中，此時(shí)蟲體尚未死亡，?？稍邴}水中繼續(xù)產(chǎn)出一部分蟲卵，爾后將蟲體取出，將此鹽水靜置沉淀，待蟲卵集中于底部后收集之。

本法所得蟲卵，因?yàn)槲唇?jīng)腸道與糞便混合，所以是無色的，與糞便中所見蟲卵，在顏色上有所不同，為此可將取得的蟲卵混入糞便中，存放數(shù)天，使之染色。

2.蟲卵標(biāo)本的保存　將蟲卵保存于瓶內(nèi)。將含有蟲卵的沉淀傾入一小燒杯中，加入已加熱到70℃～80℃的巴氏液，等冷后，保存于小口試劑瓶中，用時(shí)吸取沉淀，放于玻片上檢查。巴氏液是用福爾馬林30ml，氯化鈉7.5g，水1000ml混合而成。在以上操作中，保存液的加熱很重要，否則有些蟲卵在保存液中，仍然存活并繼續(xù)發(fā)育或變形。蟲卵保存福爾馬林液中時(shí)間不宜太久，一般不超過5年，否則往往使卵殼損壞剝離影響蟲卵鑒定。用下液固定，保存時(shí)間可得到延長。

福爾馬林10ml，95%酒精30ml，甘油4ml，蒸餾水56ml。