一、目的要求

了解植物線蟲的一般形態(tài)和植物線蟲病害癥狀特點(diǎn)，了解、掌握常用的分離線蟲的方法——漏斗分離法和直接過篩法，明確其分離原理，同時(shí)熟悉線蟲的生活史。

二、材料和用具

（一）實(shí)驗(yàn)材料

1.蔬菜根結(jié)線蟲?。∕elgidogyne incognita）標(biāo)本及大量根結(jié)

2.小麥粒線蟲?。ˋnguina tritici）標(biāo)本及大量蟲癭

3.水稻干尖線蟲?。ˋphelenchoides besseyi）標(biāo)本

4.黃麻根結(jié)線蟲?。∕.incognita）標(biāo)本

（二）實(shí)驗(yàn)用具

顯微鏡、解剖針、載玻片、蓋玻片、小培養(yǎng)皿、放大鏡、小剪刀、紗布、帶橡皮管的玻璃漏斗、止水夾、小塑料桶、漏斗架、培養(yǎng)皿、小刀、天平、篩子（60、100、200、325網(wǎng)目）、燒杯等。

三、內(nèi)容和方法

（一）實(shí)驗(yàn)原理

線蟲是一種低等動(dòng)物，屬于無脊椎動(dòng)物中線形動(dòng)物門的線蟲綱。 它的種類很多，寄生在植物體上的線蟲是其中的少部分。 植物病原線蟲能引起多種植物病害，為害根部會(huì)引起根瘤、根腫大等畸形，地上部分生長不良；為害莖、葉造成葉扭曲，小葉，黃化，皺縮，干枯等；為害果實(shí)、種子常產(chǎn)生蟲癭、腫瘤等畸形癥狀。 植物寄生線蟲的個(gè)體很小，除極少數(shù)可從植物組織中直接挑出外，絕大多數(shù)需借助特定的工具和方法才能分離出。 線蟲的分離主要是利用它的趨水性、大小及密度與其他雜質(zhì)的差異，采用過篩、離心、漂浮等措施，將其從植株組織或土壤中分離出來。

（二）實(shí)驗(yàn)方法

1.線蟲病害癥狀觀察

觀察蔬菜根結(jié)線蟲病、小麥粒線蟲病、水稻稈尖線蟲病、黃麻根結(jié)線蟲病標(biāo)本，注意根部、莖、葉、種子等的變化。

2.線蟲形態(tài)的觀察

觀察蔬菜根結(jié)線蟲，用解剖針輕輕撥開根瘤病組織，可見組織中有乳白色發(fā)亮的小顆?！Y(jié)線蟲的雌蟲，用解剖針將雌蟲挑出放于載玻片上，加1滴蒸餾水，蓋上蓋玻片，在低倍鏡下觀察蟲體形態(tài)。

用解剖針挑取組織中的線蟲，置于載玻片上并蓋片，最后用橡皮或挑針輕輕壓蓋玻片，鏡檢，觀察植物線蟲的生殖系統(tǒng)及消化系統(tǒng)。

雌蟲體為洋梨形，具有一長頸，頭部前端為口腔，內(nèi)有一吻針，后是膨大的基部球，具明顯的中食道球。 蟲體膨大的部位是腹部，后端為肛門，在腹部常能看到卵巢，卵囊是附在腹部末端的一個(gè)囊袋，內(nèi)有若干卵，卵長圓形、無色，有的卵內(nèi)可見已開始分化和形成的幼蟲。

3.線蟲漏斗分離法

該方法操作簡單，是目前從植物材料中分離線蟲較好的方法。 它利用線蟲的趨水性，使游離到水中的線蟲沉積在漏斗的底部，從而將其收集。

（1）將玻璃漏斗架在漏斗架上，漏斗下面接10cm橡皮管，橡皮管上裝1個(gè)止水夾。

（2）將寄主組織洗凈后，稱20g切碎，用紗布包好，在漏斗中浸泡24h，線蟲從寄主組織或土壤中游出，穿過紗布沉落在漏斗底部的橡皮管里。

（3）打開止水夾，把橡皮管里的水收集到培養(yǎng)皿中。

（4）鏡檢分離到的線蟲。

4.線蟲過篩分離法

此方法適合分離土壤中的線蟲。 利用線蟲的趨水性，使線蟲懸浮在水中，用篩網(wǎng)將線蟲與土壤分開，并從水中分離出線蟲。

（1）將土壤充分搗碎，混合均勻。

（2）取其中250g置于小塑料桶中，加水700~1000m L，充分?jǐn)噭?dòng)使土壤分散。

（3）沉降10s后，將上面的懸浮液通過60網(wǎng)目的篩子，過濾在第二個(gè)小塑料桶中，將60網(wǎng)目篩子上的殘余物和第一個(gè)小塑料桶桶底的泥沙，用水沖洗棄掉。

（4）將第二個(gè)小塑料桶中的液體按順序依次通過100、200、325網(wǎng)目的網(wǎng)篩，3個(gè)篩子上的殘余物分別洗在3個(gè)容量為250m L的燒杯中。

（5）鏡檢325目網(wǎng)篩過濾后溶液中的線蟲。

（三）注意事項(xiàng)

1.在分離得到的線蟲中可能有寄生和腐生的線蟲，鏡檢時(shí)要注意區(qū)分。

2.若線蟲數(shù)量太少，可將水樣倒入離心管中，在離心機(jī)中1500r/min離心3min，倒掉上層清水，將下層沉淀物重懸浮后倒入培養(yǎng)皿中再鏡檢。

四、實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)

3學(xué)時(shí)。

五、作業(yè)與思考題

1.每人交可清晰觀測玻片1~2片，并完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告1份。

2.寄生線蟲和腐生線蟲有哪些不同？在鏡檢時(shí)如何區(qū)別？

3.試描述根結(jié)線蟲雌成蟲的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征。

4.如何從寄主植物根組織中分離到根結(jié)線蟲并觀察其卵囊？