實驗實訓三　細胞有絲分裂的觀察

一、實訓目標

（1）觀察植物細胞有絲分裂的過程，識別有絲分裂的不同時期。

（2）初步掌握制作洋蔥根尖有絲分裂裝片的技術。

（3）初步掌握繪制生物圖的方法。

二、實訓原理

在植物體中，有絲分裂常見于根尖、莖尖等分生區(qū)細胞。高等植物細胞有絲分裂的過程，分為分裂間期和有絲分裂期的前期、中期、后期、末期?？梢杂酶弑讹@微鏡觀察植物細胞有絲分裂的過程，根據(jù)各個時期細胞內(nèi)染色體的變化情況，識別該細胞處于有絲分裂的哪個時期。細胞核內(nèi)的染色體容易被堿性染料（如龍膽紫溶液）著色。

三、實訓材料、試劑與儀器

1．材料

洋蔥（可以用蒜、蔥代替）。

2．試劑

15%（g/mL）的鹽酸、95%（mL/mL）的酒精、0．01g/mL或0．02g/mL的龍膽紫溶液（或醋酸洋紅液）。

3．儀器

顯微鏡、載玻片、蓋玻片、玻璃皿（3個）、剪刀、鑷子、滴管。

四、操作要點

1．洋蔥根尖的培養(yǎng)

在上實驗課之前的3～4天，取洋蔥一個，放在廣口瓶上。瓶內(nèi)裝滿清水，讓洋蔥的底部接觸到瓶內(nèi)的水面。把這個裝置放在溫暖的地方，注意經(jīng)常換水，使洋蔥的底部總是接觸到水。待根長5cm時，可取生長健壯的根尖制片觀察。

2．裝片的制作

（1）解離　上午10時至下午2時是洋蔥根尖細胞有絲分裂的活躍期，可在這個時間范圍內(nèi)剪取洋蔥的根尖2～3mm，立即放入盛有15%（g/mL）的鹽酸和95%（mL/mL）的酒精的混合液（1∶1）的玻璃皿中，在室溫下解離3～5min后取出根尖。

（2）漂洗　待根尖酥軟后，用鑷子取出，放入盛有清水的玻璃皿中漂洗約10min。

（3）染色　把洋蔥根尖放進盛有0．01g/mL或0．02g/mL的龍膽紫溶液（或醋酸洋紅液）的玻璃皿中，染色3～5min。

（4）制片　用鑷子將這段洋蔥根尖取出來，放在載玻片上，加一滴清水，并用鑷子尖把洋蔥根尖弄碎，蓋上蓋玻片，在蓋玻片上再加一片載玻片。然后用拇指輕輕地壓載玻片，這樣可以使細胞分散開來。

3．洋蔥根尖細胞有絲分裂的觀察

（1）低倍鏡觀察　把制作成的洋蔥根尖裝片先放在低倍鏡下觀察，慢慢移動裝片，要求找到分生區(qū)細胞，它的特點是：細胞呈正方形，排列緊密，有的細胞正在分裂。

（2）高倍鏡觀察　找到分生區(qū)細胞后，把低倍鏡移走，換上高倍鏡，用細準焦螺旋和反光鏡把視野調(diào)整清晰，直到看清細胞物像為止。仔細觀察，可先找出處于細胞分裂期中期的細胞，然后找出前期、后期、末期的細胞。注意觀察各個時期細胞內(nèi)染色體變化的特點。在一個視野里，往往不容易找全有絲分裂過程中各個時期的細胞。如果是這樣，可以慢慢地移動裝片，從鄰近的分生區(qū)細胞中尋找。

如果自制裝片效果不太理想，可以觀察教師演示的洋蔥根尖細胞有絲分裂的固定裝片。

五、繪圖

在觀察清楚有絲分裂各個時期的細胞以后，繪出洋蔥根尖細胞有絲分裂的簡圖。要求繪植物細胞有絲分裂中期圖。

六、問題與討論

制作好洋蔥根尖有絲分裂裝片的關鍵是什么？