一、目的要求

通過對有絲分裂孢子真菌中各類型代表菌的觀察，了解有絲分裂孢子真菌的分類依據(jù)，掌握有絲分裂孢子真菌主要屬的形態(tài)特征及其所致主要植物病害的癥狀特點，進(jìn)一步學(xué)習(xí)和訓(xùn)練制作徒手切片的技能。

二、材料和用具

（一）實驗材料

相關(guān)植物病害的標(biāo)本，病原菌的培養(yǎng)物或永久玻片。

（二）實驗用具

顯微鏡、擦鏡紙、裝有浮載劑的滴瓶、挑針、刀片、通草、剪刀、載玻片、蓋玻片、小紗布等。

三、內(nèi)容和方法

（一）絲孢綱（Hyphomycetes）

1.梨孢屬（Pyricularia）

取稻瘟病菌（P.oryzae）為害的水稻發(fā)病小枝?；蚯o節(jié)保濕，挑取病部灰白色霉層制片鏡檢，觀察分生孢子梗和分生孢子的形態(tài)。 認(rèn)真觀察稻瘟病標(biāo)本的癥狀，扼要描述稻瘟病的幾種癥狀特征和類型。

2.粉孢屬（Oidium）

引起植物白粉病。觀察小麥白粉病（O.graminis）標(biāo)本的癥狀。挑取少許粉狀物制片鏡檢觀察，注意觀察分生孢子梗和分生孢子的形態(tài)及分生孢子的排列方式。

3.青霉屬（Penicillium）

柑橘青霉病菌（P.italicum）是柑橘貯藏和運輸過程中的重要病原菌。觀察由青霉菌引起的柑橘、蘋果、梨等果腐癥狀特點。 挑取發(fā)生果腐病水果表面的白色菌絲附近的青色霉層制片鏡檢，觀察青霉菌分生孢子梗及孢子，注意觀察分生孢子梗的分枝和頂端產(chǎn)孢細(xì)胞的形態(tài)特征。

4.尾孢屬（Cercospora）

仔細(xì)觀察花生黑斑?。–a.rachidicola）為害花生的癥狀特點。取花生黑斑病葉片做徒手切片，或取花生黑斑病菌永久玻片鏡檢，觀察子座、分生孢子梗和分生孢子的形態(tài)特征。 注意觀察分生孢子梗著生的方式及其頂端的形態(tài)、分生孢子梗和分生孢子的顏色及分生孢子的形狀及分隔情況。

5.鐮孢屬（Fusarium）

觀察由棉花枯萎病菌（F.oxysporumf.sp.vasinfectum）、小麥赤霉病菌（F.graminearum）和水稻惡苗病菌（F.moniliforme）引起的植物病害癥狀特點。 觀察上述三種病原菌培養(yǎng)物的形態(tài)，注意培養(yǎng)物（基）的顏色變化。挑取培養(yǎng)物制片鏡檢，觀察大型分生孢子（鐮刀形，多細(xì)胞，基部有時有一顯著的突起，稱足胞）和小型分生孢子（單胞、無色、橢圓形），觀察有無分生孢子座。 有的鐮孢菌還產(chǎn)生一種厚垣孢子，這是病原菌在不良條件下形成的休眠孢子，抵抗不良環(huán)境的能力強。 觀察菌絲上或大型分生孢子上有無厚垣孢子。

6.輪枝孢屬（Verticillium）

大麗輪枝菌（V.dahliae）是引起棉花黃萎病的病原菌。 觀察人工培養(yǎng)的大麗輪枝菌菌落和微菌核形態(tài)特征，用刀片將菌絲塊切成一薄片，側(cè)放在載玻片上，置于低倍鏡下鏡檢，調(diào)節(jié)微調(diào)可見到無色分生孢子梗，主軸分成幾節(jié)，節(jié)處有兩個或多個分枝，每個分枝和主軸的頂端著生多個分生孢子，形成分生孢子球。 分生孢子單胞，無色，長橢圓形。 觀察棉花黃萎病標(biāo)本癥狀，注意維管束變色，并與棉花枯萎病維管束變色對比觀察。

7.鏈格孢屬（Alternaria）

茄鏈格孢（A.solani）引起馬鈴薯和番茄早疫病，觀察早疫病病葉上的褐色同心輪紋病斑，病斑上有黑色霉?fàn)钗铩?選擇有褐色同心輪紋病斑處，制作徒手切片鏡檢。 觀察分生孢子梗和分生孢子的形態(tài)、顏色。 注意分生孢子頂端的喙?fàn)罴?xì)胞。

8.離蠕孢屬（Bipolaris）

玉蜀黍離蠕孢（B.maydis）引起玉米小斑病。觀察玉米小斑病標(biāo)本的癥狀。 取玉米小斑病菌制成臨時玻片，或用玉米小斑病菌的永久玻片鏡檢，注意觀察分生孢子梗的著生情況、顏色、有無分枝和曲膝狀形態(tài)，分生孢子的顏色、多胞、紡錘形、常向一方彎曲的形態(tài)特點，注意臍點稍微突出、平截狀，分生孢子萌發(fā)時，兩端細(xì)胞萌發(fā)。此外，稻離蠕孢菌（B.oryzae）引起水稻胡麻斑病，其標(biāo)本也可作為鏡檢材料。

9.突臍蠕孢屬（Exserohilum）

大斑突臍蠕孢菌（E.turcicum）引起玉米大斑病。 觀察玉米大斑病標(biāo)本的癥狀特點，并在病斑大小和形狀上與玉米小斑病進(jìn)行比較。 取玉米大斑病菌制成臨時玻片，或用玉米大斑病菌的永久玻片鏡檢，觀察分生孢子梗和分生孢子的顏色、分隔與形態(tài)特征，注意分生孢子的臍點明顯突出于基細(xì)胞外，分生孢子萌發(fā)時兩端細(xì)胞萌發(fā)。

10.內(nèi)臍蠕孢屬（德氏霉屬Drechslera）

該菌寄主范圍窄，侵染禾本科植物和其他植物葉，引起葉斑病。 觀察小麥葉枯病（D.tritici）標(biāo)本，注意癥狀特點。 鏡檢小麥黃斑德氏霉（D. teres）或大麥條紋德氏霉（D.graminea）永久玻片，觀察分生孢子梗的單生與簇生。 注意分生孢子梗褐色具隔，上部呈曲膝狀，孢痕明顯，分生孢子圓柱形，兩端鈍圓，淡褐色，多細(xì)胞，臍點腔孔狀，凹陷于基細(xì)胞內(nèi)，萌發(fā)時每個細(xì)胞均可伸出芽管。有性態(tài)為核腔菌屬（Pyrenophora）。注意其與平臍蠕孢屬和突臍蠕孢屬的區(qū)別。

11.絲核菌屬（Rhizoctonia）

本屬真菌不產(chǎn)生任何無性孢子。 立枯絲核菌（R.solani）侵染多種植物的幼苗或幼莖基部引起立枯病，侵染水稻、玉米和小麥等引起紋枯病。 觀察水稻紋枯病標(biāo)本、棉花立枯病標(biāo)本的癥狀特點。 觀察立枯絲核菌人工培養(yǎng)物形態(tài)，注意幼齡菌絲無色，后期呈褐色。 挑取培養(yǎng)的水稻紋枯病菌菌絲體，制片觀察菌絲的顏色、分枝處的縊縮、分枝附近的隔膜和分枝間形成的角度。注意幼齡菌絲和老熟菌絲分枝間的角度常有不同。

（二）腔孢綱（Coelomycetes）

1.刺盤孢屬（Colletotrichum）

觀察棉花炭疽?。–.gossypii）、辣椒炭疽?。–.piperatum）、豆類炭疽?。–.truncatum）的標(biāo)本癥狀特征，比較癥狀類型、病斑特點及病征。選取任一炭疽病材料做徒手切片，鏡檢。 注意有無剛毛，剛毛的顏色如何，剛毛有無分隔，如何將剛毛與植物的表皮毛區(qū)分開，分生孢子盤的形狀，分生孢子梗的形狀和分布，分生孢子的顏色和形狀，分生孢子有無分隔。

2.擬盤多毛孢屬（Pestalotiopsis）

以枇杷灰斑?。≒.funerea）標(biāo)本為材料，選取粗大的小黑點，制作徒手切片，鏡檢。 觀察分生孢子的分隔數(shù)、分生孢子各細(xì)胞的顏色變化、分生孢子頂端附屬絲根數(shù)和形狀。 注意分生孢子分隔的多少是區(qū)分?jǐn)M盤多毛孢屬和盤多毛孢屬（Pestalotia）的重要標(biāo)志，盤多毛孢屬分生孢子5個隔膜，6個細(xì)胞；擬盤多毛孢屬分生孢子4個隔膜，5個細(xì)胞。

3.莖點霉屬（Phoma）

取葡萄黑腐?。≒.viticola）標(biāo)本材料，制作徒手切片鏡檢，觀察分生孢子器的形狀，內(nèi)壁是否有分生孢子梗。 分生孢子單胞，無色。 觀察葡萄黑腐病和水稻谷枯?。≒.glumarum）標(biāo)本的癥狀特點。

4.葉點霉屬（Phyllosticta）

該屬和莖點霉屬在形態(tài)上相似，比較難以區(qū)分。 傳統(tǒng)上把寄生在植物莖上的，產(chǎn)生分生孢子器，具有小型、無色、單細(xì)胞分生孢子的真菌鑒定為莖點霉屬，把寄生在植物葉片的該類真菌鑒定為葉點霉屬。 取梔子花葉斑病葉片，觀察病害癥狀特征，并制作徒手切片，鏡檢，觀察病菌的分生孢子器、分生孢子的形態(tài)特征。

5.大莖點菌屬（Macrophoma）

觀察大葉黃楊病葉材料，制作徒手切片，鏡檢。 觀察分生孢子器、分生孢子梗和分生孢子的形態(tài)特征，并與莖點霉屬和葉點霉屬相比較，注意比較它們分生孢子的大小。大莖點菌屬分生孢子大小一般超過15μm。

蘋果輪紋病菌（M.kawatsukai）主要為害蘋果、梨的枝干及果實，取其切片鏡檢病原菌的分生孢子器、分生孢子梗、分生孢子。 觀察標(biāo)本的癥狀特點。

6.擬莖點霉屬（Phomopsis）

取茄褐紋病菌（P.vexans）永久玻片或取茄褐紋病標(biāo)本材料制作徒手切片，鏡檢觀察分生孢子器內(nèi)產(chǎn)生的兩種分生孢子分別是什么形狀，注意只有觀察到線形分生孢子才能確定為擬莖點霉屬。 觀察茄褐紋病菌、蘆筍莖枯病菌（P.asparagi）標(biāo)本的癥狀特點。

7.殼針孢屬（Septoria）

觀察小麥葉枯病菌（S.fritici）永久玻片或取一年蓬葉斑病病葉作材料制作徒手切片，鏡檢。 觀察分生孢子器的形狀和分生孢子的形狀，注意分生孢子有無分隔。

8.色二孢屬（Diplodia）

取棉鈴黑果病菌（D.gossypina）的永久玻片鏡檢，觀察分生孢子器和分生孢子的形態(tài)。 注意分生孢子的顏色和分隔，單胞、無色的為初期未成熟孢子；雙胞、褐色的為成熟孢子。 觀察棉鈴黑果病病害的癥狀。

9.殼二孢屬（Ascochyta）

取蠶豆褐斑病菌（A.fabae）永久玻片鏡檢，觀察分生孢子器和分生孢子的形態(tài)，注意分生孢子的顏色和隔膜數(shù)。 分生孢子初期單胞，后期雙胞。 觀察蠶豆褐斑病的癥狀特點。

四、實驗學(xué)時

3~6學(xué)時。

五、作業(yè)與思考題

1.繪制梨孢屬和尾孢屬的分生孢子梗和分生孢子形態(tài)圖。

2.繪制刺盤孢屬和擬盤多毛孢屬的分生孢子盤和分生孢子形態(tài)圖。

3.繪制擬莖點霉屬和殼二孢屬分生孢子器和分生孢子形態(tài)圖。

4.你能在顯微鏡下分辨出分生孢子器和子囊殼嗎？如何區(qū)別？

5.為什么說有絲分裂孢子真菌和子囊菌關(guān)系極為密切？試從營養(yǎng)體、繁殖體形態(tài)以及為害植物的癥狀特點等方面加以分析。

附7-1 叢梗孢目真菌分科分屬檢索表

附7-2 黑盤孢目黑盤孢科真菌主要屬檢索表

附7-3 球殼孢目殼孢科真菌主要屬檢索表