實(shí)驗(yàn)二　蔬菜中農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)

一、我國是世界上農(nóng)藥使用量最大的國家

我國是世界上農(nóng)藥生產(chǎn)和使用大國，目前我國現(xiàn)有農(nóng)藥生產(chǎn)定點(diǎn)企業(yè)2 500多家，現(xiàn)已登記并可以生產(chǎn)的農(nóng)藥品種有600多個(gè)。我國農(nóng)藥生產(chǎn)能力約為76萬噸，總產(chǎn)量約為48萬噸，農(nóng)藥年生產(chǎn)量?jī)H次于美國而排名第二。同時(shí)，我國是世界上農(nóng)藥施用量最大的國家，平均年施用量超過130萬噸，單位面積用量是世界平均水平的2倍。

目前我國農(nóng)藥產(chǎn)品結(jié)構(gòu)不合理，產(chǎn)品質(zhì)量低，存在3個(gè)70%:一是在各類農(nóng)藥產(chǎn)量中，殺蟲劑占70%；二是殺蟲劑中有機(jī)磷農(nóng)藥占70%；三是有機(jī)磷農(nóng)藥中高毒品種占70%。這些劇毒、高毒農(nóng)藥的大量使用給生態(tài)環(huán)境帶來了日益突出的負(fù)面影響，并嚴(yán)重威脅著消費(fèi)者的身體健康和生命安全。在《中國環(huán)境優(yōu)先監(jiān)測(cè)》報(bào)告中列出的一份有機(jī)污染物“黑名單”中，有機(jī)磷農(nóng)藥就占了7種。

二、農(nóng)藥的大量使用對(duì)我國食品安全和農(nóng)產(chǎn)品出口貿(mào)易已產(chǎn)生十分嚴(yán)重的影響

隨著人類生活水平和質(zhì)量的大幅度提高，人們?cè)诔燥柕幕A(chǔ)上對(duì)農(nóng)產(chǎn)品及其加工食品的質(zhì)量提出了更高的要求，特別是對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留問題格外關(guān)注和重視。農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留超標(biāo)可造成消費(fèi)者急性中毒，出現(xiàn)頭暈、嘔吐等癥狀。長(zhǎng)期食用農(nóng)藥殘留超標(biāo)的農(nóng)產(chǎn)品或加工食品，會(huì)對(duì)消費(fèi)者的身體造成慢性危害，并可能引發(fā)多種慢性疾病，如腫瘤、生育能力降低等。

農(nóng)藥殘留超標(biāo)帶來的食品安全問題不僅影響消費(fèi)者的健康，還在很大程度上影響了我國農(nóng)產(chǎn)品出口貿(mào)易，進(jìn)而影響整個(gè)農(nóng)業(yè)的發(fā)展。近年來，我國農(nóng)產(chǎn)品因農(nóng)藥殘留超標(biāo)而被進(jìn)口國拒絕、扣留、退貨、索賠和中止合同的事件時(shí)有發(fā)生。如2002年上海出口到韓國的紫菘因農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題而遭到退貨，造成直接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)500多萬元。一些國家更是利用國際貿(mào)易技術(shù)壁壘，人為地對(duì)我國農(nóng)產(chǎn)品出口設(shè)置障礙。

三、我國已出臺(tái)農(nóng)藥殘留相關(guān)管理法規(guī)

鑒于食用農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留超標(biāo)帶來的嚴(yán)重危害，我國于1997年和1999年，由國務(wù)院分別頒布了《中華人民共和國農(nóng)藥管理?xiàng)l例》和《中華人民共和國農(nóng)藥管理?xiàng)l例實(shí)施辦法》。2001年11月29日修訂的《中華人民共和國農(nóng)藥管理?xiàng)l例》第二十七條規(guī)定“使用農(nóng)藥應(yīng)當(dāng)遵守國家有關(guān)農(nóng)藥安全、合理使用的規(guī)定，按照規(guī)定的用藥量、用藥次數(shù)、用藥方法和安全間隔期施藥，防止污染農(nóng)副產(chǎn)品。劇毒、高毒農(nóng)藥不得用于防治衛(wèi)生害蟲，不得用于蔬菜、瓜果、茶葉和中草藥材”；第三十七條規(guī)定“縣級(jí)以上各級(jí)人民政府有關(guān)部門應(yīng)當(dāng)做好農(nóng)副產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)工作，并公布檢測(cè)結(jié)果”；第三十八條規(guī)定“禁止銷售農(nóng)藥殘留量超過標(biāo)準(zhǔn)的農(nóng)副產(chǎn)品”。

四、以酶抑制法為原理的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)

如何快速、靈敏、準(zhǔn)確地檢測(cè)出農(nóng)產(chǎn)品及其加工產(chǎn)品中的殘留農(nóng)藥，是保障人民健康，控制農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)法操作簡(jiǎn)便、不需昂貴儀器，適合于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)及大批樣品的篩選檢測(cè)，主要用于防止有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒嚴(yán)重超標(biāo)的蔬菜和水果流入市場(chǎng)，主要有酶抑制法，其原理即是AChE的活性受有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥抑制，根據(jù)乙酰膽堿酯酶受抑制程度的多少來確定有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的含量。用該方法檢測(cè)農(nóng)藥殘留時(shí)，蔬菜中的水分、碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂等物質(zhì)不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成干擾，可省卻分離去雜步驟，從而達(dá)到快速檢測(cè)的目的。這一方法在國內(nèi)的使用范圍最為廣泛，同時(shí)已上升為國家標(biāo)準(zhǔn)。

五、實(shí)驗(yàn)部分

1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

學(xué)習(xí)并了解蔬菜中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的技術(shù)方法和操作步驟。

2.實(shí)驗(yàn)原理

有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶的活性有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。在一定條件下，酶催化乙酰膽堿水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)。通過在412nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算抑制率，通過抑制率可以判斷蔬菜中農(nóng)藥殘留量是否超標(biāo)。

3.所需試劑、儀器

農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)試劑盒（上海捷門保林邁生物工程有限公司提供）、殘留農(nóng)藥檢測(cè)儀、微量移液器、常量天平、恒溫水浴箱（37℃）。

4.操作步驟

按照使用說明書操作。

（1）試劑準(zhǔn)備:按照試劑盒提供的操作說明，在A、B、C三個(gè)試劑瓶中加入緩沖溶液10mL，待完全溶解，搖勻即可。

（2）樣品處理

①選取表面干凈的待檢蔬菜，用天平準(zhǔn)確稱取1g。葉菜取葉片部分，果菜、瓜菜沿皮削下一片。

②將蔬菜剪成1cm大小置于小燒杯內(nèi)，加入5mL緩沖溶液，振蕩2min。

③吸取燒杯中的上清液2.5mL，移至試管。

④另準(zhǔn)備一試管，加入2.5mL緩沖液，作為空白管。在空白管和樣品管中各加入A液和B液0.1mL，混勻，在37℃恒溫水浴箱中放置15min以上。

（3）檢測(cè)

①測(cè)試空白:在空白管中加入C液0.1mL，搖勻，立即放入儀器比色池中，進(jìn)行對(duì)照設(shè)置，保存數(shù)值，作為空白對(duì)照。

②測(cè)試樣本:在樣本管中加入C液0.1mL，搖勻，立即放入儀器比色池中，保存結(jié)果并打印。

（4）注意事項(xiàng)

①復(fù)溶后試劑需在冰箱中保存。

②蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇、番茄等的汁液中含有影響乙酰膽堿酯酶活性的物質(zhì)，容易引起假陽性。請(qǐng)避免剪碎，直接將整株浸在5mL緩沖液中即可。

③溫度對(duì)酶的活性影響較大，檢測(cè)時(shí)請(qǐng)保持室溫恒定。空白管和樣品管的測(cè)試溫度盡量保持一致，以確保檢測(cè)的準(zhǔn)確。

④同一試劑在不同室溫影響下空白可能不同，需重新測(cè)試空白以確保準(zhǔn)確。

⑤當(dāng)抑制率≥50%時(shí)，表示蔬菜中有有機(jī)磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥存在，此時(shí)需重復(fù)檢測(cè)2次以上以確保準(zhǔn)確。