（一）T細(xì)胞功能的測(cè)定

1．E花環(huán)試驗(yàn) 人類的T細(xì)胞表面具有綿羊紅細(xì)胞（Erythrocyte）受體（即CD2），又稱E受體。在體外能與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合形成花環(huán)樣結(jié)構(gòu)。試驗(yàn)時(shí)將外周血中分離的PBMC與綿羊紅細(xì)胞按一定比例混合，溫育后置4℃過(guò)夜，取細(xì)胞懸液涂片、染色、計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞，凡黏附有3個(gè)或3個(gè)以上綿羊紅細(xì)胞的淋巴細(xì)胞即為T細(xì)胞，由此可計(jì)算出T細(xì)胞數(shù)的百分率，正常為70%～80%。目前此方法主要用于T淋巴細(xì)胞的計(jì)數(shù)，而T細(xì)胞的數(shù)量在一定程度上代表了機(jī)體細(xì)胞免疫功能的強(qiáng)弱。

2．T細(xì)胞特異性抗原的檢測(cè) CD3是T細(xì)胞表面特有的抗原成分，可用其相應(yīng)的單克隆抗體進(jìn)行檢測(cè)，常采用間接免疫熒光法。先用鼠抗人CD3單克隆抗體與人外周血淋巴細(xì)胞結(jié)合，再加入熒光標(biāo)記的兔抗鼠球蛋白抗體，于熒光顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)熒光陽(yáng)性細(xì)胞的百分率，即T細(xì)胞總數(shù)。

3．T細(xì)胞亞群測(cè)定 不同的T細(xì)胞亞群含有其特有的分化抗原，如Th細(xì)胞含有CD4抗原，Tc細(xì)胞（CTL）含有CD8抗原，可用其相應(yīng)的單克隆抗體，采用上述間接免疫熒光法進(jìn)行測(cè)定。正常人CD4＋細(xì)胞與CD8＋細(xì)胞的比值約為2∶1，艾滋病患者的比值則小于1∶7。

4．T細(xì)胞增殖試驗(yàn) T細(xì)胞在受到非特異性有絲分裂原（PHA等）或特異性抗原刺激后，可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞。在細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程中細(xì)胞DNA合成增加，細(xì)胞形態(tài)改變，最終細(xì)胞分裂增殖。依據(jù)T細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率，可判斷機(jī)體的細(xì)胞免疫功能水平。

試驗(yàn)采用外周血分離的PBMC或全血，刺激物常用PHA。常用的方法有3種：①形態(tài)學(xué)方法。將淋巴細(xì)胞與PHA共同溫育72h，涂片染色后于光鏡下計(jì)數(shù)淋巴母細(xì)胞數(shù)。轉(zhuǎn)化細(xì)胞的形態(tài)特征為，細(xì)胞體積增大3～5倍，胞質(zhì)豐富，含有空泡；核染色質(zhì)疏松，出現(xiàn)1～3個(gè)核仁。一般計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞，計(jì)算出轉(zhuǎn)化的百分率。正常值為70%左右。②MTT比色法?；罴?xì)胞內(nèi)有活性的線粒體作用于MTT，生成藍(lán)色產(chǎn)物甲臜，其生成量與細(xì)胞代謝程度成正比，使用二甲基亞砜（DMSO）將其溶解后，通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光值，可定量分析細(xì)胞的增殖水平。③放射性核素?fù)饺敕?。胸腺嘧啶核苷為合成DNA的原料，按上述方法培養(yǎng)，在終止培養(yǎng)前8～16h，加入氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷（3 H-TdR），淋巴細(xì)胞在轉(zhuǎn)化成母細(xì)胞的過(guò)程中DNA合成增加，3 H-TdR可被轉(zhuǎn)化的細(xì)胞攝取。培養(yǎng)結(jié)束后，用液閃測(cè)定儀測(cè)定細(xì)胞內(nèi)放射性核素的相對(duì)含量即代表淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力。

5．細(xì)胞毒試驗(yàn) 是測(cè)定CTL細(xì)胞殺傷功能的一種試驗(yàn)。將受檢者外周血分離的PBMC或純化的CTL細(xì)胞與51Cr標(biāo)記的靶細(xì)胞按一定比例混合，37℃溫育后用γ計(jì)數(shù)儀檢測(cè)上清液中51Cr的含量。靶細(xì)胞被殺傷得越多，上清液中51 Cr的含量越多，依此推算出殺傷活性的高低。此法可用于測(cè)定機(jī)體的抗腫瘤免疫功能。

6．遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）的檢測(cè) 此方法是體內(nèi)檢測(cè)細(xì)胞免疫功能的簡(jiǎn)便易行的皮試方法。其原理是外來(lái)抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答后，再用相同抗原作皮試可導(dǎo)致遲發(fā)型超敏反應(yīng)，T細(xì)胞活化并釋放多種細(xì)胞因子，產(chǎn)生以單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥反應(yīng)，于24～48h發(fā)生，72h達(dá)到高峰。陽(yáng)性反應(yīng)表現(xiàn)為局部紅腫和硬結(jié)，反應(yīng)強(qiáng)烈的可以發(fā)生水腫，甚至壞死。細(xì)胞免疫功能正常者出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，功能低下者則呈弱陽(yáng)性或陰性反應(yīng)。目前常用于檢測(cè)某些病原微生物感染、免疫缺陷病和腫瘤患者的免疫功能測(cè)定等。皮試常用的生物抗原有結(jié)核菌素（OT）、純蛋白衍生物（PPD）、鏈激酶／鏈道酶（SK／SD）等。

（二）B細(xì)胞功能的測(cè)定

1．膜表面免疫球蛋白檢測(cè) 膜表面免疫球蛋白（mIg）為B細(xì)胞所特有，是鑒定B細(xì)胞的可靠指標(biāo)。應(yīng)用熒光素或酶標(biāo)記的抗人Ig抗體通過(guò)直接免疫熒光法或免疫酶技術(shù)檢測(cè)mIg，正常人外周血中mIg＋細(xì)胞一般為8%～12%。

2．CD抗原檢測(cè) B細(xì)胞表面抗原有CD19、CD20和CD21等分化抗原，其中有些是全部B細(xì)胞所共有，有些僅活化B細(xì)胞特有。據(jù)此可用相應(yīng)的單克隆抗體，通過(guò)直接免疫熒光法或免疫酶技術(shù)加以檢測(cè)。正常人外周血中CD20＋細(xì)胞占淋巴細(xì)胞總數(shù)的8%～12%。

3．血清免疫球蛋白含量測(cè)定 免疫球蛋白為B細(xì)胞接受抗原刺激后轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞分泌的球蛋白，檢測(cè)血清免疫球蛋白水平可判斷B細(xì)胞功能。常用指標(biāo)有血型抗體、IgG、IgM、IgA等。

4．B細(xì)胞增殖試驗(yàn) 與T細(xì)胞增殖試驗(yàn)相似，B細(xì)胞受絲裂原刺激后，被激活發(fā)生分裂、增殖反應(yīng)，通過(guò)檢查細(xì)胞增殖程度，可反映B細(xì)胞的功能。小鼠B細(xì)胞可用細(xì)菌脂多糖（LPS）作為刺激物，人則用含SPA的金黃色葡萄球菌菌體及抗IgM抗體作為刺激物。

5．抗體形成細(xì)胞測(cè)定 常采用溶血空斑試驗(yàn)，即測(cè)定對(duì)綿羊紅細(xì)胞（SRBC）產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞數(shù)目。基本過(guò)程是：首先用SRBC免疫小鼠，無(wú)菌取脾制備成脾細(xì)胞（含致敏B細(xì)胞）懸液；將脾細(xì)胞懸液與單層貼壁的SRBC混合，如被SRBC致敏的B細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過(guò)程中，合成并分泌溶血素，溶血素則與周圍的SRBC結(jié)合，在補(bǔ)體參與下，出現(xiàn)溶血反應(yīng)，形成空斑。每一個(gè)空斑中央含一個(gè)抗體形成細(xì)胞，空斑數(shù)目即為抗體形成細(xì)胞數(shù)。

（三）NK細(xì)胞功能的測(cè)定

1．NK細(xì)胞計(jì)數(shù) 自然殺傷細(xì)胞（nature killer cell，NK cell）是參與固有免疫應(yīng)答的重要細(xì)胞，在早期識(shí)別、殺傷腫瘤細(xì)胞中具有重要作用。目前多以CD3-、CD16＋、CD56＋作為NK細(xì)胞的典型標(biāo)志。臨床上常采用三色熒光標(biāo)記單克隆抗體（抗CD3、抗CD16和抗CD56）標(biāo)記NK細(xì)胞，通過(guò)流式細(xì)胞儀進(jìn)行三參數(shù)分析。健康成人外周血NK細(xì)胞占淋巴細(xì)胞總數(shù)的8%～15%。

2．NK細(xì)胞的細(xì)胞毒試驗(yàn) NK細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用，能直接殺傷靶細(xì)胞。通過(guò)細(xì)胞毒試驗(yàn)可測(cè)定人NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，具體方法與CTL的細(xì)胞毒試驗(yàn)類似。測(cè)定人NK細(xì)胞活性以K562細(xì)胞株作為靶細(xì)胞，而測(cè)定小鼠NK細(xì)胞活性常采用YAC-1細(xì)胞株作為靶細(xì)胞。