生物樣品測定的關(guān)鍵是方法學(xué)的確證。方法學(xué)確證是整個藥動學(xué)研究的基礎(chǔ)。所有藥動學(xué)研究結(jié)果，都依賴于生物樣品的測定，只有可靠的方法才能得出可靠的結(jié)果。

1．特異性 是指在樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確、專一地測定分析物的能力。必須證明所測定物質(zhì)是受試藥品的原形藥物或特定活性代謝物，生物樣品所含內(nèi)源性物質(zhì)和相應(yīng)代謝物、降解產(chǎn)物不得對樣品測定造成干擾。對于色譜法至少要考察6個不同個體的空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品色譜圖，以反映分析方法的特異性。對于以軟電離質(zhì)譜為基礎(chǔ)的檢測法（LC-MS、LCMS-MS）應(yīng)注意考察分析過程中的介質(zhì)效應(yīng)，如離子抑制等。

2．標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量范圍 用至少5個濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，應(yīng)使用與待測樣品相同的生物介質(zhì)，定量范圍要能覆蓋全部待測濃度，不允許將定量范圍外推求算未知樣品的濃度。微生物學(xué)或免疫學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線本質(zhì)上是非線性的，所以盡可能采用比化學(xué)分析更多的濃度點來建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)所測定物質(zhì)的濃度與響應(yīng)的相關(guān)性，用回歸分析方法獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線高低濃度范圍為定量范圍，在定量范圍內(nèi)濃度測定結(jié)果應(yīng)達(dá)到試驗要求的精密度和準(zhǔn)確度。

3．精密度與準(zhǔn)確度 質(zhì)控樣品指在空白生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用于監(jiān)測生物分析方法的重復(fù)性和評價每一分析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。一般選擇3個濃度的質(zhì)控樣品同時進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察。低濃度選擇在定量下限附近，其濃度在定量下限的3倍以內(nèi)；高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限；中間選一個濃度。每一濃度每批至少測定5個樣品，為獲得批間精密度，應(yīng)至少連續(xù)3個分析批合格。精密度相對標(biāo)準(zhǔn)差一般應(yīng)＜15%，在定量下限附近相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)＜20%。準(zhǔn)確度一般應(yīng)在85%～115%范圍內(nèi)，在定量下限附近應(yīng)在80%～120%范圍內(nèi)。

4．定量下限 是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點，要求至少能滿足測定3～5個半衰期時樣品中的藥物濃度，或Cmax的1／10～1／20時的藥物濃度，其準(zhǔn)確度應(yīng)在真實濃度的80%～120%范圍內(nèi)，相對偏差應(yīng)＜20%。應(yīng)由至少5個標(biāo)準(zhǔn)樣品測試結(jié)果證明。

5．提取回收率 從生物樣本中回收得到分析物質(zhì)的響應(yīng)值除以相同濃度標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的響應(yīng)值即為提取回收率?？疾旄摺⒅?、低3個濃度的提取回收率，其結(jié)果應(yīng)精密且重現(xiàn)。

6．樣品穩(wěn)定性 根據(jù)具體情況，對含藥生物樣品在室溫、凍存和凍融循環(huán)等影響因素下樣品穩(wěn)定性進(jìn)行考察，以確定生物樣品穩(wěn)定的存放條件和時間，應(yīng)在確保樣品穩(wěn)定的條件下進(jìn)行保存和測定。