1．檢驗(yàn)?zāi)康?/p>

檢測(cè)紅細(xì)胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清（或血漿）中抗A、抗B抗體，確定受檢者ABO及RhD血型。

2．檢驗(yàn)原理

2.1 手工試管法、玻片法或紙板法　利用標(biāo)準(zhǔn)IgM抗A/B血清鑒定紅細(xì)胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO血型反定紅細(xì)胞鑒定同一標(biāo)本血清（或血漿）中的抗A/B抗體即反定型，綜合正反定型結(jié)果確定受檢標(biāo)本ABO血型；利用標(biāo)準(zhǔn)IgM抗D直接鑒定RhD血型。

2.2 微柱凝膠法　ABO/RhD卡的微管中裝填有葡聚糖凝膠顆粒和抗A、抗B、抗D標(biāo)準(zhǔn)血清，如果紅細(xì)胞表面存在A或B或D抗原，就會(huì)與對(duì)應(yīng)的抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，凝膠顆粒具有分子篩的作用，可以阻滯凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下通過(guò)凝膠顆粒，使其懸浮在凝膠顆粒中，未凝集的紅細(xì)胞則可以通過(guò)凝膠顆粒到達(dá)微管底部。

2.3 玻璃珠微柱法　ABO/RhD卡的微管中裝填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D標(biāo)準(zhǔn)血清，如果紅細(xì)胞表面存在A或B或D抗原，就會(huì)與對(duì)應(yīng)的抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，玻璃微珠具有分子篩的作用，可以阻滯凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下通過(guò)玻璃微珠，使其懸浮在玻璃微珠層的上端，未凝集的紅細(xì)胞則可以通過(guò)玻璃微珠之間的微小空隙到達(dá)微管底部。

3．適用范圍

適用于手工、半自動(dòng)、全自動(dòng)ABO血型及RhD血型鑒定試驗(yàn)。

4．設(shè)備性能參數(shù)

各種血型檢測(cè)系統(tǒng)性能指標(biāo)參見(jiàn)相應(yīng)血型檢測(cè)系統(tǒng)說(shuō)明書(shū)。

5．器材與試劑

5.1 器材：WADiana全自動(dòng)血型配血系統(tǒng)、SWING-SAXO血型配血系統(tǒng)、Techno全自動(dòng)血型配血系統(tǒng)、強(qiáng)生Othro Autovue Innova全自動(dòng)血型及配血系統(tǒng)、B 600-A型低速離心機(jī)、KA-2200血清學(xué)專(zhuān)用離心機(jī)、閱片燈箱、塑料軟試管、塑料硬質(zhì)試管（100 mm×12 mm和75 mm×12 mm）、血型鑒定專(zhuān)用紙板、玻片、試管架、一次性塑料滴管、記號(hào)筆。

5.2 試劑：Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO/RhD血型卡、Othro Biovue ABO/RhD血型卡、2%氫氧化鈉溶液、生理鹽水、抗A/B標(biāo)準(zhǔn)血清、抗D標(biāo)準(zhǔn)血清、3%～5%反定試劑紅細(xì)胞、1%反定試劑紅細(xì)胞。

6．標(biāo)本要求

EDTA-K3或EDTA-K2抗凝靜脈血≥3 ml經(jīng)B 600-A型離心機(jī)1 760 r/min離心5 min，離心后無(wú)溶血及明顯乳糜。緊急情況下可以使用抗凝動(dòng)脈血。

7．校準(zhǔn)步驟

各類(lèi)血型配血系統(tǒng)的校準(zhǔn)操作過(guò)程分別見(jiàn)《WADiana全自動(dòng)血型配血系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》、《SWING-SAXO血型配血系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》、《Techno全自動(dòng)血型配血系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》、《強(qiáng)生Othro Autovue Innova全自動(dòng)血型及配血系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》。

8．操作步驟

8.1 試管法

8.1.1 ABO血型正定型試驗(yàn)

8.1.1.1 取兩支潔凈試管，做好標(biāo)記，按試管標(biāo)記向試管中加入抗-A、抗-B血清各1滴；

8.1.1.2 向每管中各加入1滴3%～5%被檢紅細(xì)胞鹽水（血清或血漿）懸液；

8.1.1.3 輕輕混合試管內(nèi)容物，經(jīng)KA-2200離心機(jī)1 000 r/min離心15 s；

8.1.1.4 結(jié)果判斷：將試管拿成銳角，緩慢傾斜，使液體通過(guò)細(xì)胞扣，當(dāng)細(xì)胞不再附著在試管上時(shí)，繼續(xù)緩慢地傾斜和振搖，直到形成均勻的細(xì)胞懸液或凝集塊；

8.1.1.5 記錄結(jié)果：記錄觀察到的凝集程度或溶血程度。用ABO反定型試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證正定型結(jié)果。

8.1.2 ABO血型反定型試驗(yàn)

8.1.2.1 取兩支潔凈試管，做好標(biāo)記，向每管中各加2滴被檢血清（或血漿）；

8.1.2.2 按試管標(biāo)記向試管中加入3%～5%A型、B型試劑紅細(xì)胞各1滴；

8.1.2.3 輕輕混合試管內(nèi)容物，經(jīng)KA-2200離心機(jī)1 000 r/min離心15 s；

8.1.2.4 結(jié)果判斷：將試管拿成銳角，緩慢傾斜，使液體通過(guò)細(xì)胞扣，當(dāng)細(xì)胞不再附著在試管上時(shí)，繼續(xù)緩慢地傾斜和振搖，直到形成均勻的細(xì)胞懸液或凝集塊；

8.1.2.5 記錄結(jié)果：記錄觀察到的凝集程度或溶血程度。與正定型結(jié)果進(jìn)行相互驗(yàn)證；

8.1.2.6 如果反應(yīng)較弱，可將試管于室溫（或4℃）放置5～10 min，以促進(jìn)弱抗體的反應(yīng)，再離心觀察結(jié)果。如果反應(yīng)還是很弱可以增加血清（或血漿）滴數(shù)，最多到6滴以加強(qiáng)反應(yīng)。

8.1.3 RhD血型鑒定試驗(yàn)

8.1.3.1 取一支潔凈試管，做好標(biāo)記，加入抗-D血清1滴；

8.1.3.2 向試管中加入1滴3%～5%被檢紅細(xì)胞鹽水（血清或血漿）懸液；

8.1.3.3 輕輕混合試管內(nèi)容物，經(jīng)KA-2200離心機(jī)1 000 r/min離心15 s；

8.1.3.4 結(jié)果判斷：將試管拿成銳角，緩慢傾斜，使液體通過(guò)細(xì)胞扣，當(dāng)細(xì)胞不再附著在試管上時(shí)，繼續(xù)緩慢地傾斜和振搖，直到形成均勻的細(xì)胞懸液或凝集塊；

8.1.3.5 記錄結(jié)果：記錄觀察到的凝集程度或溶血程度。

8.2 玻片法

8.2.1 ABO血型正定型

8.2.1.1 在標(biāo)記的玻片上分別加1滴抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清，再各加1滴紅細(xì)胞懸液（按試劑說(shuō)明書(shū)的要求配制受檢者紅細(xì)胞濃度）；

8.2.1.2 用干凈的玻璃棒將紅細(xì)胞懸液和試劑充分混合，并把混合物均勻涂開(kāi)，使其覆蓋大約20 mm×20 mm的面積；

8.2.1.3 緩慢連續(xù)傾斜轉(zhuǎn)動(dòng)玻片2 min，觀察結(jié)果并記錄。不要把玻片放在加熱的表面物上，以防水分蒸發(fā)。

8.2.1.4 結(jié)果判斷

8.2.1.4.1 凝集或發(fā)生溶血為陽(yáng)性結(jié)果；

8.2.1.4.2 細(xì)胞混勻2 min后仍呈懸液狀態(tài)的為陰性結(jié)果；

8.2.1.4.3 對(duì)結(jié)果有懷疑，應(yīng)用試管法重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

8.2.1.5 注意事項(xiàng)

8.2.1.5.1 玻片試驗(yàn)不適用于ABO反定型試驗(yàn)。

8.2.1.5.2 不要混淆玻片邊緣干燥的紅細(xì)胞與真凝集。

8.2.2 RhD抗原定型試驗(yàn)

8.2.2.1 在一塊標(biāo)記的干凈玻片上加1滴IgM或（IgM+IgG）抗D標(biāo)準(zhǔn)血清；

8.2.2.2 在第二塊標(biāo)記的玻片上加1滴合適的對(duì)照試劑；

8.2.2.3 在每塊玻片上加2滴受檢者40%～50%紅細(xì)胞懸液；

8.2.2.4 用玻棒將細(xì)胞懸液試劑充分混合，并把混合物均勻涂開(kāi)，使其覆蓋玻片20 mm×20 mm面積；

8.2.2.5 把兩塊玻片同時(shí)放在觀察箱上，緩慢連續(xù)傾斜轉(zhuǎn)動(dòng)并觀察凝集。多數(shù)試劑要求試驗(yàn)必須在2 min內(nèi)判讀結(jié)果。

8.2.2.6 結(jié)果判斷

8.2.2.6.1 當(dāng)含有抗D血清的玻片上出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集而對(duì)照玻片上是均勻紅細(xì)胞懸液時(shí)為陽(yáng)性結(jié)果；

8.2.2.6.2 當(dāng)含有抗D試劑的玻片和對(duì)照玻片上都是均勻的細(xì)胞懸液時(shí)，提示是陰性結(jié)果，如果要進(jìn)行RhD陰性確認(rèn)試驗(yàn)，可參照《RhD血型確證試驗(yàn)（卡式抗人球法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》；

8.2.2.6.3 如對(duì)照玻片上出現(xiàn)凝集，在未經(jīng)進(jìn)一步試驗(yàn)之前，不能解釋為陽(yáng)性結(jié)果；

8.2.2.6.4 玻片邊緣附近的干涸不應(yīng)該混淆為凝集。

8.3 紙板法（ABO血型正、反定型及RhD定型同時(shí)鑒定）

8.3.1 取潔凈五孔血型鑒定專(zhuān)用紙板，做好姓名標(biāo)記；

8.3.2 按紙板標(biāo)識(shí)向每孔中分別加入相應(yīng)試劑抗A、抗B、抗D血清各1滴以及受檢者血清各2滴；

8.3.3 各孔中分別加入受檢者紅細(xì)胞適量及相應(yīng)所需3%～5%A型、B型試劑紅細(xì)胞（自制或商品化試劑）并攪勻；

8.3.4 輕輕旋轉(zhuǎn)搖晃混勻，直到形成均勻的細(xì)胞懸液或凝集塊，邊搖邊觀察；

8.3.5 3 min以上觀察結(jié)果。記錄觀察到的凝集程度或溶血程度。

8.4 制備反定紅細(xì)胞的操作步驟

8.4.1 分別取3～5人份已知A、B血型的紅細(xì)胞，同型混合后用生理鹽水洗滌、離心（前兩次1 760 r/min，3 min，第三次1 760 r/min，5 min）3次，去上清制備成壓積紅細(xì)胞；

8.4.2 用生理鹽水配成濃度為5%的試劑紅細(xì)胞：9.5 ml生理鹽水加0.5 ml壓積紅細(xì)胞；

8.4.3 配制好的紅細(xì)胞懸液應(yīng)使用抗A、抗B標(biāo)準(zhǔn)血清進(jìn)行血型鑒定，A細(xì)胞與抗A、B細(xì)胞與抗B均應(yīng)出現(xiàn)(＋＋＋＋)強(qiáng)度的凝集；

8.4.4 保存條件：配制好的5%的紅細(xì)胞懸液在試管上注明紅細(xì)胞血型及配制時(shí)間，2～8℃避光保存，有效期24 h；

8.4.5 將用于制備反定紅細(xì)胞的供者信息及血型復(fù)核結(jié)果記錄在《反定試劑紅細(xì)胞制備登記表》上。

8.5 WADiana全自動(dòng)ABO及RhD血型鑒定

參照《WADiana全自動(dòng)血型配血系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》進(jìn)行。

8.6 SWING-SAXO系統(tǒng)ABO及RhD血型鑒定

參照《SWING-SAXO血型配血系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》進(jìn)行。

8.7 Techno全自動(dòng)血型/配血系統(tǒng)ABO及RhD血型鑒定

參照《Techno全自動(dòng)血型配血系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》進(jìn)行。

8.8 Othro Autovue Innova全自動(dòng)ABO及RhD血型鑒定

參照《強(qiáng)生Othro Autovue Innova全自動(dòng)血型配血系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》進(jìn)行。

8.9 檢驗(yàn)結(jié)果的輸入與確認(rèn)

8.9.1 啟動(dòng)“檢驗(yàn)程序”，輸入用戶(hù)名及口令后，進(jìn)入檢驗(yàn)程序。

8.9.2 自動(dòng)傳輸結(jié)果的輸入　單擊“檢驗(yàn)”菜單，選擇“檢驗(yàn)結(jié)果錄入\修改”，進(jìn)行檢驗(yàn)結(jié)果的錄入及修改。輸入工作單號(hào)儀器會(huì)自動(dòng)傳輸檢測(cè)結(jié)果。

8.9.3 非傳輸結(jié)果及鏡檢結(jié)果的輸入　單擊“檢驗(yàn)”菜單，選擇“檢驗(yàn)結(jié)果錄入\修改”，通過(guò)申請(qǐng)序號(hào)進(jìn)行檢驗(yàn)結(jié)果的錄入及修改。

8.9.4 檢驗(yàn)結(jié)果的確認(rèn)　檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或授權(quán)人員進(jìn)行確認(rèn)，方法為單擊“結(jié)果處理”菜單，選擇“報(bào)告確認(rèn)”進(jìn)入結(jié)果確認(rèn)，通過(guò)選擇“工作單元”、“報(bào)告日期”、“單張”或“批量”后，按“提取”鍵提取已經(jīng)傳輸或錄入的檢驗(yàn)結(jié)果，經(jīng)兩人核對(duì)無(wú)誤后按“確認(rèn)”鍵進(jìn)行確認(rèn)。

9．質(zhì)量控制

9.1 室內(nèi)質(zhì)量控制

9.1.1 手工試管法、玻片法或紙板法：每日（或當(dāng)日更換試劑包裝時(shí)）進(jìn)行試劑質(zhì)控，具體操作參照《輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)量控制管理程序》進(jìn)行。

9.1.2 全自動(dòng)卡式：每日（或當(dāng)日更換試劑批號(hào)時(shí)）進(jìn)行過(guò)程質(zhì)控，具體操作參照《輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)量控制管理程序》進(jìn)行。

9.2 室間質(zhì)量評(píng)價(jià)

參加衛(wèi)生部臨檢中心組織的全國(guó)輸血相容性檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)。

10．干擾因素

10.1 嚴(yán)重的黃疸或脂血使全自動(dòng)血型檢測(cè)系統(tǒng)出現(xiàn)反定型假陽(yáng)性；

10.2 冷凝集素或異常球蛋白增高會(huì)使紅細(xì)胞出現(xiàn)異常凝集，從而影響正定型或（和）反定型結(jié)果，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；

10.3 受檢者使用羥乙基淀粉、右旋糖苷等藥物時(shí)可能會(huì)使細(xì)胞出現(xiàn)假凝集，干擾正反定型結(jié)果。

11．結(jié)果計(jì)算及測(cè)量不確定度

不適用。

12．生物參考區(qū)間

12.1 ABO血型鑒定　A、B、O、AB血型。

12.2 RhD血型鑒定　陰性或陽(yáng)性。

13．檢驗(yàn)結(jié)果可報(bào)告區(qū)間

13.1 ABO血型鑒定　A、B、O、AB血型。

13.2 RhD血型鑒定　陰性或陽(yáng)性。

14．警告/危急值

受檢者出現(xiàn)亞型或因產(chǎn)生不規(guī)則抗體干擾血型鑒定可能影響常規(guī)輸血時(shí)，應(yīng)及時(shí)通知臨床醫(yī)生，必要時(shí)通知患者或家屬。

15．實(shí)驗(yàn)室解釋

出現(xiàn)亞型結(jié)果時(shí)應(yīng)遵守相應(yīng)的輸血原則。

16．安全性預(yù)警措施

16.1 實(shí)驗(yàn)室及工作人員一般安全防護(hù)措施參見(jiàn)《實(shí)驗(yàn)室安全與衛(wèi)生管理程序》。

16.2 發(fā)生血液標(biāo)本溢出時(shí)，應(yīng)參照《實(shí)驗(yàn)室消毒與清潔程序》對(duì)污染的環(huán)境進(jìn)行消毒處理。

16.3 操作人員發(fā)生職業(yè)暴露時(shí)，應(yīng)參照《實(shí)驗(yàn)室職業(yè)暴露預(yù)防與處理程序》及時(shí)進(jìn)行相應(yīng)處理。

16.4 在儀器運(yùn)轉(zhuǎn)過(guò)程中，勿觸及樣品針、移動(dòng)的傳輸裝置等，避免造成人身傷害。禁止觸摸儀器密封面板內(nèi)的電路，防止造成電擊損傷。

16.5 對(duì)突發(fā)傳染性疾病的血液標(biāo)本應(yīng)啟動(dòng)特殊的安全防護(hù)程序。

17．變異潛在來(lái)源

17.1 出生6個(gè)月以?xún)?nèi)新生兒，體內(nèi)可能尚無(wú)ABO血型抗體產(chǎn)生，血型以正定型為準(zhǔn)；

17.2 老年患者、急性白血病患者、腫瘤患者可能出現(xiàn)血型抗原減弱而影響正定型結(jié)果；

17.3 ABO亞型會(huì)影響正常結(jié)果的判讀,出現(xiàn)正定型減弱或出現(xiàn)假陰性,導(dǎo)致正反定型不一致。

18．ABO及RhD血型鑒定試驗(yàn)特別注意事項(xiàng)

18.1 正反定型不一致的標(biāo)本一律使用試管法重復(fù)試驗(yàn)；18.2 正定弱于（＋＋＋），一律用試管法重復(fù)試驗(yàn)，并根據(jù)情況加做其他試驗(yàn)；18.3 玻片法、紙板法試驗(yàn)要注意結(jié)果觀察時(shí)間，既不能過(guò)短，因反應(yīng)不充分出現(xiàn)假陰性，也不能過(guò)長(zhǎng)（一般不超過(guò)5 min），因水分蒸發(fā)造成紅細(xì)胞假凝集；

18.4 實(shí)驗(yàn)室自制試劑紅細(xì)胞需經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)血清正定型鑒定無(wú)誤后方可使用；

18.5 試劑紅細(xì)胞需將3個(gè)以上健康供者同型新鮮紅細(xì)胞混合，用生理鹽水充分洗滌3次，以除去存在于血清中的抗體、蛋白成分及可溶性抗原；

18.6 所有全自動(dòng)方法的注意事項(xiàng)分別參照各檢測(cè)系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

19．報(bào)告時(shí)間

ABO及RhD血型鑒定于當(dāng)日下午17點(diǎn)前出結(jié)果并上傳HIS系統(tǒng)。

20．參考文獻(xiàn)

[1] WADiana全自動(dòng)血型配血系統(tǒng)、SWING-SAXO血型配血系統(tǒng)、Techno全自動(dòng)血型配血系統(tǒng)、Othro Autovue Innova全自動(dòng)血型及配血系統(tǒng)、抗A/B標(biāo)準(zhǔn)血清、抗D標(biāo)準(zhǔn)血清、反定試劑紅細(xì)胞使用說(shuō)明書(shū)．

[2] 臨床輸血技術(shù)規(guī)范．中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司．北京，2000．

[3] 中國(guó)輸血技術(shù)操作規(guī)程（血站部分）．．中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司．天津，

1997．