一、目的要求

了解根腫菌、卵菌的主要形態(tài)特征，掌握與植物病害有關(guān)的重要屬的形態(tài)特征、分類依據(jù)及所致病害的癥狀特點(diǎn)。 同時(shí)學(xué)習(xí)使用檢索表來(lái)鑒定病原菌，為分類鑒定打下初步基礎(chǔ)。

二、材料和用具

（一）實(shí)驗(yàn)材料

相關(guān)植物病害的標(biāo)本、病原菌的培養(yǎng)物或永久玻片，水霉和腐霉游動(dòng)孢子的形成和釋放錄像。

（二）實(shí)驗(yàn)用具

顯微鏡、擦鏡紙、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、載玻片、蓋玻片、挑針、刀片、通草、剪刀、吸水紙、酒精燈、火柴等。

三、內(nèi)容和方法

（一）根腫菌綱（Plasmodiophoromycetes）

1.根腫菌屬（Plasmodiophora）

觀察蕓薹根腫?。≒.brassicae）標(biāo)本的癥狀，注意受害植株的根部是否腫大。 鏡檢蕓薹根腫病菌永久玻片，觀察休眠孢子的分布位置、形態(tài)及有無(wú)細(xì)胞壁。 對(duì)比有病菌侵害和沒(méi)有病菌侵害的植物細(xì)胞的大小及內(nèi)含物。 注意區(qū)分原生質(zhì)團(tuán)和休眠孢子。

2.粉痂菌屬（Spongospora）

觀察馬鈴薯粉痂?。⊿.subterranea）標(biāo)本的癥狀。 鏡檢馬鈴薯粉痂病菌永久玻片，觀察休眠孢子的分布和形態(tài)特征以及有病菌的寄主細(xì)胞有無(wú)明顯腫大。

3.多黏菌屬（Polymyxa）

觀察禾谷多黏病菌（P.graminis）引起的小麥病害癥狀。用鑷子撕取小麥根基皮層，制成臨時(shí)玻片鏡檢，或鏡檢禾谷多黏病菌永久玻片，觀察病菌休眠孢子及其排列特征。

（二）卵菌綱（Oomycetes）

1.水霉目（Saprolegniales）

通常生活于水中或潮濕土壤中，營(yíng)腐生生活，僅少數(shù)與植物病害有關(guān)，如寄生于稻苗引起爛秧。

（1）水霉屬（Saprolegnia）

孢子囊圓筒形或棍棒狀，新孢子囊從老孢子囊內(nèi)的基部長(zhǎng)出。 游動(dòng)孢子具明顯的兩游現(xiàn)象〔水稻爛秧水霉菌（S.monilifera）〕。觀看水霉屬的游動(dòng)孢子兩游現(xiàn)象錄像。

（2）綿霉屬（Achlya）

觀察水稻爛秧癥狀。 用鑷子取病苗放于盛有淺水的培養(yǎng)皿中，直接在低倍鏡下檢查，或用鑷子小心撕下病苗上的棉絮狀物制成臨時(shí)玻片鏡檢。 注意比較游動(dòng)孢子囊和菌絲的形態(tài)有無(wú)顯著區(qū)別，觀察孢子囊的層出現(xiàn)象屬于哪種層出類型，游動(dòng)孢子釋放是迅速離開孢子囊還是在排孢孔口處休止、聚集，觀察是否產(chǎn)生有性器官，仔細(xì)觀察藏卵器、雄器和卵孢子的形態(tài)，雄器的位置，藏卵器內(nèi)卵球的數(shù)目。

根據(jù)所觀察到的病原菌形態(tài)，參照水霉屬和綿霉屬的分類依據(jù)，推測(cè)所看到的病菌屬于哪個(gè)屬。

2.霜霉目（Peronosporales）

許多霜霉目卵菌是重要的植物病原菌。

（1）腐霉屬（Pythium）

瓜果腐霉（P.aphanidermatum）可以引起多種經(jīng)濟(jì)作物幼苗的猝倒病和果實(shí)的綿腐病。

觀察黃瓜病果上的白色菌絲體。 將生長(zhǎng)旺盛的小塊菌絲體移至清水中20℃培養(yǎng)24~48h，菌絲頂端即形成大量游動(dòng)孢子囊，用挑針挑取在清水中培養(yǎng)過(guò)的菌絲制片鏡檢。 觀察腐霉菌的游動(dòng)孢子囊。 注意區(qū)分菌絲、孢囊梗和孢子囊。 觀察泡囊及游動(dòng)孢子的形態(tài)特征。注意觀察藏卵器和雄器的特征，并與水稻綿霉菌的藏卵器和雄器相比較。

（2）疫霉屬（Phytophthora）

致病疫霉（P.infestans）引起馬鈴薯晚疫病。觀察受害馬鈴薯葉片的病害癥狀。 觀察當(dāng)氣候潮濕時(shí)病葉背面常出現(xiàn)的灰白色霜狀霉層是病菌的什么形態(tài)，挑取少許霉?fàn)钗镏破?，鏡檢。 觀察孢子囊是什么形狀，孢囊梗和菌絲的形態(tài)有何不同?；蛱羧煵菀呙梗≒.nicotianae）水培養(yǎng)中的菌絲體，用水作為浮載劑制片，鏡檢。 注意孢子囊頂部的乳頭狀突起，折光率較強(qiáng)的即乳突。注意有無(wú)球形厚垣孢子，觀察孢子囊形狀的變化。將玻片放入4℃冰箱5~10min，取出立即鏡檢，觀察孢子囊內(nèi)游動(dòng)孢子的形成和釋放過(guò)程，注意其與腐霉菌的區(qū)別。

上述兩個(gè)疫霉種均為異宗配合菌種，將兩種不同交配型的菌株移植在同一平板上于18~20℃培養(yǎng)10~20d，就會(huì)出現(xiàn)有性生殖過(guò)程。挑取兩菌株形成的菌落交界處帶培養(yǎng)基的菌絲鏡檢雄器和藏卵器的形態(tài)，比較馬鈴薯晚疫病菌和腐霉菌的藏卵器與雄器的著生方式有何區(qū)別。

（3）霜疫霉屬（Peronophthora）

荔枝霜疫霉病菌（P.litchi）為害荔枝引起霜霉病，觀察受害果實(shí)癥狀。取病果挑取霉層制片鏡檢，注意其孢囊梗直立，雙叉銳角分枝，孢囊梗多級(jí)有限生長(zhǎng)；孢子囊檸檬形、橢圓形，乳突明顯。

（4）單軸霉屬（Plasmopara）

觀察葡萄霜霉?。≒v.iticola）標(biāo)本，注意為害部位及癥狀特點(diǎn)。 挑取葡萄霜霉病病葉病斑上的霉層制片鏡檢，觀察孢子囊梗的形態(tài)，注意分枝特點(diǎn)及分枝末端的特征。

（5）假霜霉屬（Pseudoperonospora）

觀察黃瓜霜霉病（Pc.ubensis）標(biāo)本，注意為害部位和癥狀特點(diǎn)。 挑取霉層制片鏡檢，觀察孢囊梗和孢子囊，注意孢囊梗的分枝特點(diǎn)，區(qū)分其與霜霉屬形態(tài)有何異同。

（6）盤梗霉屬（Bremia）

觀察萵苣霜霉?。˙l.actucae）標(biāo)本，注意癥狀特點(diǎn)。挑取病葉上的霉層制片鏡檢，觀察孢子囊梗的形態(tài)，注意分枝末端是否膨大呈盤狀，邊緣是否有小梗，孢子囊的形態(tài)及著生位置如何。

（7）霜霉屬（Peronospora）

十字花科植物霜霉菌（P.parasitica）為害油菜和其他十字花科蔬菜引起霜霉病。 觀察十字花科霜霉菌為害油菜葉片正面和背面及花序的癥狀。 取白菜霜霉病葉片，用挑針挑取少量在葉背面的霜霉制片鏡檢，注意觀察孢囊梗的分枝和頂端形態(tài)以及孢子囊有無(wú)乳突。

（8）白銹菌屬（Albugo）

觀察白銹病癥狀特征。 制作莧菜白銹病菌（A.bliti）或白菜白銹病菌（A.candida）臨時(shí)玻片鏡檢，觀察其孢子囊堆和孢子囊梗的形態(tài)特征以及孢子囊的排列方式。

取白菜白銹病腫大的莖或莢，選取白色皰斑處切片，置于滴加乳酚油的載玻片上，用酒精燈略加熱，使病組織透明，然后蓋上蓋玻片鏡檢。 可觀察到白銹病菌的卵孢子，1個(gè)藏卵器內(nèi)只有1個(gè)卵球。 卵孢子表面有刻點(diǎn)狀花紋，是白銹菌分類的依據(jù)之一。

3.指梗霉目（Sclerosporales）

本目區(qū)別于霜霉目的主要特征是孢囊梗主軸粗壯或分化程度較低，專性寄生于禾本科植物。

（1）指梗霉屬（Sclerospora）

觀察禾生指梗霉（S.graminicola）引起的谷子白發(fā)病的癥狀特點(diǎn)。鏡檢病原菌永久玻片，觀察孢囊梗的形態(tài)、分枝，游動(dòng)孢子囊及卵孢子的形態(tài)。

（2）霜指霉屬（Peronosclerospora）

觀察玉蜀黍霜指霉（P.maydis）引起玉米霜霉病的癥狀特點(diǎn)。鏡檢病原菌永久玻片，觀察孢囊梗的分枝及形態(tài)，游動(dòng)孢子囊及卵孢子的形態(tài)。

（3）指疫霉屬（Sclerophthora）

觀察大孢指疫霉（S.macrospora）引起小麥霜霉病的癥狀特點(diǎn)。鏡檢病原菌永久玻片，觀察孢囊梗的形態(tài)及分枝、游動(dòng)孢子囊及卵孢子的形態(tài)。

四、實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)

3~5學(xué)時(shí)。

五、作業(yè)與思考題

1.觀察十字花科蔬菜根腫病菌、馬鈴薯粉痂病菌、禾谷多黏病菌，繪制休眠孢子囊圖。

2.繪制瓜果腐霉病菌、馬鈴薯晚疫病菌或十字花科蔬菜白銹病菌孢囊梗、孢子囊、卵孢子圖。

3.繪制白菜霜霉病菌孢囊梗、孢子囊圖。

4.卵菌綱有哪些特點(diǎn)？結(jié)合它們的生物學(xué)特點(diǎn)、寄生性及病害特點(diǎn)描述卵菌綱的進(jìn)化情況。

附8-1 霜霉目真菌科及主要屬分類檢索表