1．受試者例數(shù)　8～12例。

2．分組　一般選用低、中、高三種劑量。劑量的確定主要根據(jù)Ⅰ期臨床耐受性試驗(yàn)的結(jié)果，以及經(jīng)討論后確定的Ⅱ期臨床試驗(yàn)時(shí)采用的治療劑量，高劑量組劑量必須小于人最大耐受的劑量。

3．生物樣品分離與測(cè)試方法常用HPLC法分離，紫外光檢測(cè)器，可根據(jù)測(cè)試藥品的具體情況選擇連用，氣相色譜、氣質(zhì)聯(lián)合等分析方法，除紫外光檢測(cè)外，也可選擇熒光檢測(cè)或可見光檢測(cè)，抗菌藥物常除化學(xué)法外，同時(shí)用微生物法測(cè)定其中一種劑量血藥濃度，對(duì)兩種測(cè)試方法進(jìn)行比較。

4．測(cè)定方法的標(biāo)準(zhǔn)化與質(zhì)控

（1）靈敏度：用最低檢測(cè)濃度或定量限（Limit of quantitation，LOQ）來表示。要求能測(cè)出3～5個(gè)消除半衰期時(shí)血藥濃度或能檢測(cè)出Cmax的1／10～1／20時(shí)的血藥濃度。

（2）特異性：必須能證明所測(cè)的藥物為原型藥物或其代謝物，并能排除某些內(nèi)源性物質(zhì)、相應(yīng)代謝物和雜質(zhì)的干擾。

（3）精密度：用日內(nèi)及日間變異系數(shù)（RSD＝（SD／X）×100%）考察方法的精確度。要求在校正曲線范圍內(nèi)選擇低（接近LOQ），中和高（接近上限）三種濃度，每一濃度重復(fù)測(cè)定5次，求出各自的RSD（%）。一般RSD＜15%，在LOQ附近時(shí)則應(yīng)＜20%。

（4）準(zhǔn)確度（相對(duì)回收率）：即用質(zhì)控樣品的實(shí)測(cè)濃度與真實(shí)濃度的偏差表示。同樣在校正曲線范圍內(nèi)選擇低、中、高三個(gè)濃度，每一濃度重復(fù)5次。一般偏差應(yīng)少于15%，在LOQ附近＜20%。

（5）提取回收率（絕對(duì)回收率）：應(yīng)考察高、中、低三個(gè)濃度的提取回收率，一般應(yīng)高于50%。

（6）校正曲線：不同生物樣品應(yīng)制備各自的校正曲線，每條校正曲線應(yīng)至少由5個(gè)濃度組成，應(yīng)覆蓋整個(gè)生物樣品的濃度范圍，不得外推。校正曲線不包括零點(diǎn)，要求提供校正曲線的線性方程和相關(guān)系數(shù)，一般相關(guān)系數(shù)為≥0．95。

（7）樣品穩(wěn)定性：對(duì)保存在冷凍或室溫條件下以及凍結(jié)－融化過程中的樣品應(yīng)進(jìn)行穩(wěn)定性考查。

（8）方法學(xué)質(zhì)控：在測(cè)定生物樣品中藥物濃度時(shí)應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制。在每批樣品測(cè)定時(shí)應(yīng)同時(shí)制備空白、低、中、高四分質(zhì)控（標(biāo)準(zhǔn)濃度）管和制備校正曲線。

5．藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定

（1）血藥濃度測(cè)定。

（2）尿藥濃度測(cè)定與尿中排出百分率。

（3）試驗(yàn)中測(cè)得的各受試者的血藥濃度－時(shí)間的數(shù)據(jù)一般可用模型法或非房室模型分析，進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的估算，求得新藥的主要藥代動(dòng)學(xué)中參數(shù)，包括有：Ka，Tmax（實(shí)測(cè)值），Cmax（實(shí)測(cè)值），AUC（梯形法求算），Vd，Kel，t1／2和CL等。從尿約濃度估算藥物經(jīng)腎排泄的速率和總量。