一、目的要求

認識植物病毒病害的癥狀特性和主要癥狀類型，掌握病毒內(nèi)含體的本質(zhì)及撕片法制片觀察技術，了解病毒內(nèi)含體的一般形態(tài)，為植物病毒病的診斷奠定基礎。

二、材料和用具

（一）實驗材料

1.病害標本

（1）煙草花葉病毒?。═obacco mosaic virus）標本

（2）蠶豆花葉病毒?。˙road bean mosaic virus）標本及新鮮病葉

（3）蘿卜花葉病毒?。≧adish mosaic virus）標本

（4）番茄條紋病毒病（Tomato stripe virus）標本

（5）馬鈴薯卷葉病毒?。≒otato leaf roll virus）標本

（6）番茄蕨葉病毒?。═omato fern leaf virus）標本

（7）榨菜縮葉病毒?。∕ustard leaf curl virus）標本

2.藥品

魯戈爾碘液、錐蘭染液等。

（二）實驗用具

顯微鏡、載玻片、蓋玻片、尖頭鑷子、刀片、浮載劑等。

三、內(nèi)容和方法

（一）實驗原理

1.病毒病害的癥狀

植物病毒病害的癥狀識別是病毒病診斷的重要方法，植物病毒病害的癥狀主要有變色、壞死、畸形。

（1）變色

植物器官部分褪綠而形成斑駁的稱為花葉，全面褪色的稱為黃化。 典型的花葉癥狀最先表現(xiàn)為葉脈透明（明脈），以后表現(xiàn)為葉色的深淺不一，濃綠與淡綠相嵌，葉面皺縮不平。

（2）壞死

受病的寄主組織局部枯死。 枯死發(fā)生于葉片的稱為枯斑，發(fā)生在莖稈和果實上的稱為條紋或條斑。

（3）畸形

受病植株全株或部分器官與正常植株在形態(tài)上出現(xiàn)差異。

2.病毒內(nèi)含體

植物病毒病在寄主外表無病征，但是有些病毒病在受侵染細胞中常見到一定形狀的內(nèi)含體。 其中一些可在光學顯微鏡下檢查到，還有一些必須通過電鏡才能看到。 存在于細胞核內(nèi)的稱為核內(nèi)含體，存在于細胞質(zhì)的稱為細胞質(zhì)內(nèi)含體。 不同屬的植物病毒往往產(chǎn)生不同類型不同形狀的內(nèi)含體，通常有不定形、結晶狀、風輪狀等。 不定形內(nèi)含體是由病毒粒體和寄主細胞成分混合組成的，而晶體狀內(nèi)含體一般是由病毒粒體整齊排列堆疊而成。 內(nèi)含體的差異可作為某些病毒種屬的一個參考鑒別特征，如只有馬鈴薯Y病毒屬（Po-tyvirus）才形成風輪狀內(nèi)含體。

（二）病毒病害的癥狀觀察

1.變色

觀察煙草花葉病毒病、蠶豆花葉病毒病標本，注意葉片顏色的變化，葉片厚薄是否均勻、有無皺縮、植株的哪些葉片表現(xiàn)出的癥狀最明顯。

觀察馬鈴薯卷葉病毒病的癥狀，注意病株變黃、葉片上卷等現(xiàn)象。

2.壞死

觀察番茄條紋病毒病，注意受病部位和枯死癥狀。

3.畸形

觀察番茄蕨葉病毒病和榨菜縮葉病毒病標本，注意哪些部位組織的形態(tài)與健全的植株不同。

（三）病毒內(nèi)含體觀察

1.撕片法直接檢查

取顯癥的蠶豆花葉病葉片，用尖頭鑷子從褪綠部位撕取一層下表皮，置于載玻片上的小水滴中，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下直接觀察，在蠶豆的表皮細胞內(nèi)可見不定形的內(nèi)含體。

2.魯戈爾碘液染色

用碘1g，碘化鉀2g，蒸餾水300m L配成碘液。滴1滴碘液于載玻片上。用鑷子撕取蠶豆花葉病病葉下表皮置于碘液中染色2~3min，加蓋蓋玻片，置于顯微鏡下觀察。 可見表皮細胞內(nèi)細胞核被染成鮮黃色，蠶豆花葉病毒不定形內(nèi)含體被染成黃褐色。

（四）注意事項

1.內(nèi)含體多存在于明顯癥狀的葉片中，尤以葉片表皮細胞和表皮內(nèi)為多，因此撕取葉片時一定要撕取有明顯癥狀的。

2.觀察內(nèi)含體時注意與細胞核區(qū)別。 一般細胞核邊緣光滑，核膜清楚，呈橢圓形，而內(nèi)含體邊緣不光滑。

四、實驗學時

3學時。

五、作業(yè)與思考題

1.每人交清晰檢測玻片1~2片，并完成實驗報告1份。

2.病毒的內(nèi)含體與寄主植物細胞核之間有什么區(qū)別？

3.撕片法直接檢察病毒內(nèi)含體時為什么要取下表皮？